A型塞內(nèi)卡病毒（Senecavirus A,SVA）是小RNA病毒科,塞內(nèi)卡病毒屬成員。SVA臨床癥狀主要以腹瀉、鼻及蹄部囊泡、糜爛等癥狀為特征,與口蹄疫病毒（FMDV）、水皰性口炎病毒（VSV）、豬傳染性水皰病毒（SVDV）及豬水皰性皮疹病毒（VESV）引起的癥狀難以區(qū)分。各年齡段的豬均可以感染該病毒,對(duì)養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的困擾。本試驗(yàn)從發(fā)生水皰性疾病的豬的水皰液中分離鑒定了SVA毒株,并對(duì)ICR小鼠進(jìn)行感染試驗(yàn)。2017年,南方某豬場(chǎng)發(fā)生不明病原引起的水皰性疾病,該場(chǎng)豬均接種過(guò)FMDV疫苗。通過(guò)RT-PCR方法檢測(cè),確定引起該場(chǎng)水皰性疾病的病原為SVA。通過(guò)BHK21細(xì)胞分離2株病毒,并通過(guò)RT-PCR、間接免疫熒光試驗(yàn)、電鏡觀察進(jìn)行鑒定,將分離鑒定的2株病毒分別命名為CH/FuJ/2017與CH/FuJ1/2017,并對(duì)其進(jìn)行測(cè)序和分析;結(jié)果表明,CH/FuJ/2017與CH/FuJ1/2017之間核苷酸序列同源性為99.7%,與國(guó)內(nèi)參考株核苷酸序列同源性在96.1%⁹8.0%,與SVV-001株核苷酸序列同源性為93.9%,與國(guó)外參考株之間核苷酸序列同源性為9... 

【文章來(lái)源】：黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)黑龍江省

【文章頁(yè)數(shù)】：88 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 A型塞內(nèi)卡病毒的基因組結(jié)構(gòu)及編碼蛋白質(zhì)
        1.1.1 A型塞內(nèi)卡病毒的基因組結(jié)構(gòu)
        1.1.2 L蛋白
        1.1.3 P1 蛋白
        1.1.4 P2 蛋白
        1.1.5 P3 蛋白
    1.2 A型塞內(nèi)卡病毒的發(fā)病機(jī)制
    1.3 A型塞內(nèi)卡病毒的流行病學(xué)
    1.4 A型塞內(nèi)卡病毒的診斷
    1.5 A型塞內(nèi)卡病毒的預(yù)防和控制
    1.6 小RNA病毒小鼠感染模型研究進(jìn)展
    1.7 目的意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 樣品來(lái)源
        2.1.2 細(xì)胞
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 試驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.5 主要試驗(yàn)儀器設(shè)備
    2.2 病毒的分離鑒定
        2.2.1 樣品處理
        2.2.2 引物
        2.2.3 RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄
        2.2.4 樣品的RT-PCR檢測(cè)
        2.2.5 細(xì)胞培養(yǎng)及傳代
        2.2.6 病毒的分離及鑒定
        2.2.7 TCID50 的測(cè)定
        2.2.8 一步生長(zhǎng)曲線的測(cè)定
        2.2.9 SVA全基因組序列測(cè)定及分析
        2.2.10 動(dòng)物回歸試驗(yàn)
    2.3 TaqMan熒光定量PCR方法建立
        2.3.1 引物設(shè)計(jì)
        2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)品的制備
        2.3.3 TaqMan熒光定量PCR方法反應(yīng)條件優(yōu)化
        2.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制
        2.3.5 特異性試驗(yàn)
        2.3.6 敏感性試驗(yàn)
        2.3.7 重復(fù)性試驗(yàn)
    2.4 SVA感染ICR小鼠試驗(yàn)
        2.4.1 感染途徑的確定
        2.4.2 SVA感染不同日齡ICR小鼠的測(cè)定
        2.4.3 病毒組織臟器分布及病毒載量測(cè)定
        2.4.4 SVA/ICR-F10 的分離鑒定
        2.4.5 SVA/ICR-F10 TCID50 及一步生長(zhǎng)曲線的測(cè)定
        2.4.6 SVA/ICR-F10 感染ICR乳鼠試驗(yàn)
        2.4.7 中和抗體效價(jià)的測(cè)定
        2.4.8 SVA感染對(duì)脾淋巴細(xì)胞的影響
    2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 病毒的分離鑒定
        3.1.1 樣品的RT-PCR檢測(cè)
        3.1.2 病毒的分離鑒定
        3.1.3 TCID50 的測(cè)定
        3.1.4 一步生長(zhǎng)曲線的測(cè)定
        3.1.5 SVA全基因組序列測(cè)定及分析
        3.1.6 動(dòng)物回歸試驗(yàn)
    3.2 TaqMan熒光定量PCR方法建立
        3.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品的制備
        3.2.2 TaqMan熒光定量PCR方法反應(yīng)條件優(yōu)化
        3.2.3 TaqMan熒光定量PCR方法標(biāo)準(zhǔn)曲線
        3.2.4 特異性試驗(yàn)
        3.2.5 敏感性試驗(yàn)
        3.2.6 重復(fù)性試驗(yàn)
    3.3 SVA感染ICR小鼠試驗(yàn)
        3.3.1 感染途徑的測(cè)定
        3.3.2 SVA感染不同日齡ICR小鼠的測(cè)定
        3.3.3 組織分布及病毒載量
        3.3.4 SVA/ICR-F10 的分離鑒定
        3.3.5 SVA/ICR-F10 TCID_(50)及一步生長(zhǎng)曲線
        3.3.6 SVA/ICR-F10 感染ICR乳鼠試驗(yàn)
        3.3.7 中和抗體效價(jià)測(cè)定
        3.3.8 SVA感染對(duì)脾淋巴細(xì)胞的影響
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3637546