為探究綿羊肺炎支原體（MO）是否對(duì)人體造成潛在影響,本研究以人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞為細(xì)胞模型,將MO Y98株熒光染色后感染人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞,于激光共聚焦顯微鏡下可見MO存在于細(xì)胞中;分別利用CCK-8及CellTiter-Lumi^TM試劑盒檢測細(xì)胞的增殖及活力,結(jié)果顯示MO對(duì)人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞的增殖及活性均無顯著影響;掃描電鏡檢測細(xì)胞形態(tài),結(jié)果顯示肺泡上皮細(xì)胞偽足明顯增多;基因芯片分析篩選出3個(gè)mRNA及5個(gè)lncRNA,熒光定量PCR驗(yàn)證后確定SCNN1G、LOX、ST6GALNAC1及l(fā)ncRNA RP11-29G8.3-001在MO感染后的轉(zhuǎn)錄水平發(fā)生顯著變化;熒光定量PCR檢測肺泡上皮細(xì)胞中IL-1β、TNF-α、IFN、IRF7等炎癥因子,結(jié)果顯示這些因子基因的轉(zhuǎn)錄水平無明顯變化;采用將lncRNA RP11-29G8.3-001過表達(dá)的方法對(duì)其功能進(jìn)行研究,結(jié)果顯示少量lncRNA RP11-29G8.3-001表達(dá)增高不會(huì)調(diào)控細(xì)胞免疫相關(guān)基因的表達(dá)。本研究結(jié)果表明MO并不降低人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞的增殖及活性,且MO對(duì)人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞炎癥因子的表達(dá)無顯... 

【文章來源】：中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2020,42(10)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

MO感染人肺泡II型上皮細(xì)胞模型的建立

為了觀察MO感染人肺泡II型上皮細(xì)胞后的形態(tài)變化，本實(shí)驗(yàn)采用掃描電鏡進(jìn)行觀察，結(jié)果顯示：人肺泡II型上皮細(xì)胞在感染MO后會(huì)伸出很多偽足（圖3），推測MO刺激細(xì)胞后伸出的偽足可能是MO進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)的原因。2.4 MO感染人肺泡II型上皮細(xì)胞中相關(guān)基因表達(dá)及轉(zhuǎn)錄水平的檢測

以往研究顯示，肺炎支原體可以通過對(duì)宿主細(xì)胞的黏附、膜融合、營養(yǎng)剝奪、侵入、毒力因子等作用直接損傷宿主細(xì)胞[7]。但本實(shí)驗(yàn)通過CCK-8及細(xì)胞ATP水平檢測等手段，發(fā)現(xiàn)MO感染人肺泡II型上皮細(xì)胞48 h后，感染組及對(duì)照組細(xì)胞數(shù)量及細(xì)胞活性并無明顯改變，推測MO感染可能不會(huì)引起人肺泡II型上皮細(xì)胞增殖能力降低甚至死亡。利用DIO熒光染色的MO感染人肺泡II型上皮細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)MO可以進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中，而且掃描電鏡結(jié)果發(fā)現(xiàn)MO感染會(huì)促進(jìn)人肺泡II型上皮細(xì)胞伸出偽足，推測MO可能利用胞飲進(jìn)入細(xì)胞。而支原體和細(xì)胞膜成分相似，這可能也是MO進(jìn)入細(xì)胞的一個(gè)途徑。圖5 lnc RNA RP11-29G8.3-001在人肺泡II型上皮細(xì)胞中的表達(dá)量變化

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]重組甲型流感病毒基質(zhì)蛋白1和2通過ERK信號(hào)因子誘導(dǎo)小鼠氣管上皮細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ[J]. 祝潔,朱顏鑫,曹慧軍,羅紅,蘭露莎,江滟.  病毒學(xué)報(bào). 2018(05)
[2]高氧環(huán)境下ROS對(duì)腸上皮細(xì)胞表達(dá)TNF-α和HIF-1-α的影響[J]. 趙敏,唐詩邈,劉冬妍.  實(shí)用藥物與臨床. 2017(02)
[3]從湖羊肺臟中分離綿羊肺炎支原體的鑒定[J]. 李媛,陶岳,阿依吐拉·肉孜,高玉龍,尹訓(xùn)南,李新萍,張孝恩,王硯范,辛九慶.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2006(04)



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