豬肉是我國(guó)居民重要的動(dòng)物蛋白來(lái)源,隨著國(guó)民生活水平的不斷提高,人們對(duì)豬肉品質(zhì)、產(chǎn)量的要求也越來(lái)越高。因此從改善肌肉發(fā)育等性狀的角度來(lái)提高豬肉的品質(zhì)和產(chǎn)量成為了豬遺傳改良的重點(diǎn)。目前很多報(bào)道都已證實(shí)印記基因在骨骼肌的發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮了不可替代的作用,其中就有H19-IGF2印記基因簇。已有的研究表明H19、IGF2呈反向表達(dá)模式,且H19內(nèi)部生成的miR-675能抑制C2C12細(xì)胞增殖,siH19和過(guò)表達(dá)let7都能促進(jìn)C2C12細(xì)胞分化,但目前H19/IGF2印記基因簇調(diào)控骨骼肌發(fā)育的機(jī)理還不是很清楚,在豬中未見(jiàn)報(bào)道。本研究較系統(tǒng)地揭示了H19、IGF2、miR-675印記簇基因及H19互作的let7家族基因在大白豬、梅山豬骨骼肌組織及成肌細(xì)胞C2C12分化過(guò)程中的表達(dá)規(guī)律,并對(duì)C2C12成肌分化過(guò)程中H19啟動(dòng)子甲基化水平、轉(zhuǎn)錄調(diào)控規(guī)律進(jìn)行了研究。主要取得以下結(jié)果：（1）通過(guò)定量的方法證實(shí)H19、IGF2在梅山、大白豬骨骼肌發(fā)育中的表達(dá)規(guī)律是一致的,H19、IGF2在胚胎50d骨骼肌中的表達(dá)水平比95d略低,但胚胎期表達(dá)水平都極顯著高于成年期。品種間比較發(fā)現(xiàn),梅山豬胚胎50d和95d骨... 

【文章來(lái)源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省211工程院校教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：69 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
1 前言
    1.1 研究問(wèn)題的由來(lái)
    1.2 豬骨骼肌的發(fā)生發(fā)育過(guò)程
    1.3 骨骼肌發(fā)育的分子機(jī)理
        1.3.1 與肌肉發(fā)育相關(guān)的生肌調(diào)節(jié)因子
        1.3.2 與肌肉發(fā)育相關(guān)的信號(hào)通路
        1.3.3 miRNA對(duì)骨骼肌發(fā)育的重要調(diào)控作用
        1.3.4 印記基因?qū)趋兰“l(fā)育的相關(guān)研究
    1.4 H19/IGF2印記基因簇對(duì)骨骼肌發(fā)育有重要的調(diào)控作用
    1.5 H19、IGF2的研究進(jìn)展
        1.5.1 印記基因的表達(dá)模式
        1.5.2 甲基化對(duì)H19、IGF2的重要調(diào)控作用
        1.5.3 轉(zhuǎn)錄因子對(duì)H19的調(diào)控作用
        1.5.4 miRNA對(duì)H19調(diào)控研究
    1.6 H19-IGF2印記基因簇內(nèi)其他基因的研究進(jìn)展
    1.7 本研究的目的與意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 小鼠、豬組織樣
        2.1.2 菌株和載體
        2.1.3 細(xì)胞
        2.1.4 試劑
        2.1.5 主要試劑的配制
        2.1.6 主要分子生物學(xué)軟件及數(shù)據(jù)庫(kù)
    2.2 方法
        2.2.1 細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.2.2 miRNAs及基因表達(dá)量分析
        2.2.3 啟動(dòng)子載體的構(gòu)建
        2.2.4 細(xì)胞的轉(zhuǎn)染
        2.2.5 細(xì)胞的處理與收集
        2.2.6 雙熒光素酶檢測(cè)及數(shù)據(jù)分析
        2.2.7 甲基化檢測(cè)及數(shù)據(jù)分析
    2.3 本研究的技術(shù)路線
3 結(jié)果
    3.1 H19、IGF2以及l(fā)et7家族在大白、梅山豬三個(gè)時(shí)期中的組織表達(dá)規(guī)律檢測(cè)
    3.2 let7家族與H19以及pH值的相關(guān)性研究結(jié)果
    3.3 在小鼠中H19、miR-675-3p組織表達(dá)譜
    3.4 H19-IGF2印記基因簇相關(guān)基因在C2C12細(xì)胞分化過(guò)程中的表達(dá)情況
    3.5 H19啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性檢測(cè)
        3.5.1 H19轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)在線軟件預(yù)測(cè)
        3.5.2 H19啟動(dòng)子載體構(gòu)建及雙熒光活性檢測(cè)
    3.6 H19基因DMR區(qū)甲基化水平分析
        3.6.1 H19基因CpG島的在線預(yù)測(cè)
        3.6.2 H19基因上游CTCF結(jié)合位點(diǎn)的確定
        3.6.3 H19基因DMR區(qū)測(cè)序分析
        3.6.4 卡方檢驗(yàn)在各時(shí)間點(diǎn)C2C12細(xì)胞中4個(gè)CTCF位點(diǎn)的甲基化差異情況
4 討論
    4.1 關(guān)于H19基因在組織、細(xì)胞中的表達(dá)
    4.2 關(guān)于H19-IGF2基因簇相關(guān)基因?qū)19的調(diào)控作用
    4.3 關(guān)于miRNA對(duì)H19的調(diào)控研究
    4.4 關(guān)于H19在C2C12細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究
5 小結(jié)
    5.1 本研究的主要結(jié)果
    5.2 本研究的創(chuàng)新點(diǎn)和特色
    5.3 本研究的不足及下一步工作建議
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3614915