【目的】對(duì)流產(chǎn)馬駒組織進(jìn)行馬流產(chǎn)沙門(mén)氏菌的分離和鑒定,以分離株制備凝集抗原,旨在建立一種敏感、特異、操作簡(jiǎn)便和高通量的微量凝集方法,實(shí)現(xiàn)對(duì)馬流產(chǎn)沙門(mén)氏菌抗體進(jìn)行快速檢測(cè)。【方法】利用沙門(mén)氏菌顯色培養(yǎng)基對(duì)流產(chǎn)的馬駒臟器進(jìn)行細(xì)菌分離,對(duì)紫色菌落進(jìn)行革蘭氏染色鑒定;提取細(xì)菌全基因組,利用16S rRNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增和測(cè)序鑒定,并對(duì)菌株進(jìn)行生化鑒定和血清型鑒定,對(duì)病因進(jìn)行綜合診斷。利用分離獲得的陽(yáng)性菌株進(jìn)行滅活后作為凝集抗原,以馬流產(chǎn)沙門(mén)氏菌標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清作為陽(yáng)性對(duì)照,通過(guò)反應(yīng)條件優(yōu)化,建立微量凝集試驗(yàn)方法,并對(duì)該方法的特異性、敏感性、重復(fù)性進(jìn)行了驗(yàn)證。與國(guó)家行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中的試管凝集試驗(yàn)方法進(jìn)行對(duì)比,同時(shí)利用微量凝集對(duì)華北和西北各3個(gè)地方的共151份血清樣品進(jìn)行檢測(cè),并隨機(jī)選取30份樣品,利用微量凝集和試管凝集進(jìn)行檢測(cè),并對(duì)兩種方法檢測(cè)的敏感性進(jìn)行比較分析�！窘Y(jié)果】各流產(chǎn)馬駒組織在沙門(mén)氏菌顯色培養(yǎng)基上劃線結(jié)果,均可以獲得大量紫色目標(biāo)菌落;革蘭氏染色結(jié)果表明,分離的菌株為革蘭氏陰性短桿菌,16S rRNA測(cè)序證實(shí)分離株為沙門(mén)氏菌屬,生化鑒定結(jié)果表明,分離的17株菌均符合馬流產(chǎn)沙門(mén)氏菌的生化特性,但相... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué). 2020,53(10)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：10 頁(yè)

【部分圖文】：

沙門(mén)氏菌的分離與鑒定

將獲得17株分離株分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增16S rRNA基因，擴(kuò)增的產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳。電泳初步表明，獲得了1條約1 500bp的特異性條帶，與預(yù)期大小相一致（圖2）。將E.S-1—17株的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，氨基酸同源性和核苷酸同源性分析結(jié)果表明，E.S-1—17的16S基因組與C77-1序列完全一致，同源性為100%，與同屬沙門(mén)氏菌AL513382-Typhimurium（鼠傷寒沙門(mén)氏菌）、CP000026-Paratyphi A（甲型副傷寒沙門(mén)氏菌）、CP000857-Paratyphi C（丙型副傷寒沙門(mén)氏菌）、NZ＿CM001062-Choleraesuis（豬霍亂沙門(mén)氏菌）、P125109-Enteritidis（腸炎沙門(mén)氏菌）同源性為97.4%—99.7%，而與其他細(xì)菌同源性為38.4%—40.7%，選取E.S株的的序列進(jìn)行進(jìn)化樹(shù)分析顯示，沙門(mén)氏菌屬與其他種屬細(xì)菌的同源性低，具有獨(dú)立的分支，屬內(nèi)細(xì)菌間同源性較高（圖3）。圖3 不同細(xì)菌16S rRNA基因的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)

馬流產(chǎn)沙門(mén)氏菌的凝集結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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