睪丸支持細(xì)胞（sertoli cell）被認(rèn)為是生精細(xì)胞的支架細(xì)胞，能夠?yàn)樯?xì)胞提供必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，并且合成和分泌雄激素結(jié)合蛋白，為生精細(xì)胞提供高濃度的雄激素環(huán)境，對(duì)精子發(fā)生發(fā)揮著重要的作用。因此，研究睪丸支持細(xì)胞的體外培養(yǎng)與生物學(xué)特性，不僅對(duì)支持細(xì)胞潛在的功能研究提供基礎(chǔ)，而且對(duì)雄性不育、器官移植以及轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)等問題的解決開辟了廣闊的前景。本研究首先利用組合酶消化法分離出犢牛睪丸支持細(xì)胞，并采用差速貼壁法對(duì)支持細(xì)胞進(jìn)行純化，進(jìn)一步通過免疫細(xì)胞化學(xué)和分子標(biāo)記檢測(cè)技術(shù)對(duì)支持細(xì)胞純度進(jìn)行了鑒定；對(duì)不同血清濃度條件下支持細(xì)胞的培養(yǎng)特性進(jìn)行了分析；此外，本研究采用MTT提取比色方法對(duì)支持細(xì)胞的體外增殖特性進(jìn)行了分析比較；通過克隆擴(kuò)增出牛DAZL基因并構(gòu)建其真核表達(dá)載體pEGFP-N3-DAZL，采用脂質(zhì)體介導(dǎo)使其轉(zhuǎn)染至睪丸支持細(xì)胞，利用Real-time PCR技術(shù)檢測(cè)支持細(xì)胞中過表達(dá)DAZL后精子發(fā)生相關(guān)基因的表達(dá)變化，并通過G418篩選穩(wěn)定過表達(dá)DAZL的細(xì)胞株。本研究為闡明支持細(xì)胞的體外培養(yǎng)特性及生物學(xué)應(yīng)用前景奠定基礎(chǔ)，主要研究結(jié)果如下：（1）利用組合酶法可以對(duì)犢牛睪丸支持細(xì)胞進(jìn)行... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

睪丸組織結(jié)構(gòu)

逐漸形成精子尾部，線粒體成為精子尾部中段的線粒體鞘膜，細(xì)胞質(zhì)則大部分脫落，僅由極少量的細(xì)胞質(zhì)被保留在精子中。圖1-2 精子發(fā)生示意圖Fig. 1-2 Spermatogenesis schematic models1.2.3 支持細(xì)胞對(duì)精子發(fā)生的影響1.2.3.1 支持細(xì)胞的發(fā)育和成熟支持細(xì)胞也需要經(jīng)歷發(fā)育成熟的過程。處于青春期前的動(dòng)物支持細(xì)胞屬于未成熟型，未成熟型的支持細(xì)胞有三種類型，Sf、Sa 和 Sb 型。處于胚胎型的支持細(xì)胞我們將之稱為 Sf 型，并于出生后 2w 轉(zhuǎn)化為 Sa 型。在 1 歲左右，Sa 型進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為 Sb 型。當(dāng)機(jī)體發(fā)育至青春期，Sb 型支持細(xì)胞又轉(zhuǎn)化為成熟型（Sc）。研究表明，Sf、Sa 和 Sb 型支持細(xì)胞的吞噬能力都很強(qiáng)而且能夠抑制精原細(xì)胞的減數(shù)分裂。動(dòng)物經(jīng)過青春期，支持細(xì)胞經(jīng)過一系列形態(tài)結(jié)構(gòu)變化至 Sc 型

[26]。圖1-3 牛睪丸組織切片F(xiàn)ig. 1-3 Histological section through testicular parenchyma of a bull1：管腔；2：精細(xì)胞；3：精母細(xì)胞；4：精原細(xì)胞；5：支持細(xì)胞；6：成肌纖維細(xì)胞；7：間質(zhì)細(xì)胞；8：微血管1: Lumen of Tubulus seminiferus contortus; 2: Spermatids; 3: Spermatocytes; 4: Spermatogonia; 5:Sertoli cell; 6: Myofibroblasts; 7: Leydig cells; 8: capillaries支持細(xì)胞分泌的抑制素（Inhibin）可以從支持細(xì)胞頂部進(jìn)入曲細(xì)精管管腔，然后匯入睪丸網(wǎng)并吸收入血；也可從基底部進(jìn)入間質(zhì)后吸收入血。但成熟睪丸中 96%的抑制素是分泌入管腔的，可能與成熟睪丸的 BTB 日趨完善有關(guān)。臨床上利用 Inhibin 抑制生育，但不影響生6

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]Desert Hedgehog誘導(dǎo)大鼠胚胎中腦神經(jīng)前體細(xì)胞定向分化的研究[D]. 楊彩俠.河北醫(yī)科大學(xué) 2009



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