Mx蛋白是具有抗病毒活性的蛋白,在機(jī)體內(nèi)由干擾素誘導(dǎo)產(chǎn)生,但目前鴨Mx蛋白抗病毒的具體機(jī)制尚未確定,制備可用于檢測鴨Mx蛋白的單克隆抗體,有助于闡明鴨Mx蛋白的結(jié)構(gòu)及其在抗病毒感染中的作用,為深入研究水禽Mx蛋白功能提供必要的物質(zhì)基礎(chǔ)。在分析本實驗室已克隆的鴨Mx基因編碼氨基酸的同源性及其抗原性的基礎(chǔ)上,以實驗室保存的重組質(zhì)粒pMD19-T Simple Mx為模板,通過PCR擴(kuò)增得到鴨Mx-A（1-300 bp）、Mx-B（1798-2163 bp）、Mx-C（418-939 bp）、Mx-CDS目的基因,并將鴨Mx的三段截短基因同時亞克隆至pET-30a（+）和pET-32a（+）原核表達(dá)載體中,構(gòu)建原核重組表達(dá)載體,經(jīng)重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá),獲得重組鴨Mx截短蛋白rDupET-30a-Mx-A、rDupET-30a-Mx-B、rDupET-30a-Mx-C、rDupET-32a-Mx-A、rDupET-32a-Mx-B、rDupET-32a-Mx-C。與此同時構(gòu)建鴨Mx基因的真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-Mx-CDS。以rDupET-30a-Mx-A、rDupET-30a-Mx-B、... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

GTPase結(jié)構(gòu)功能區(qū)示意圖(引自O(shè)ttoHaller,2007)

23間 Mx-A 序列相似性分析；B: 不同物種間 Mx-B 序列相似性分析；C: 不同物種間 Mx-C 序列相似性分析 sequence similarity analysis among different species; B: Mx-B sequence similarity analysis amongdifferent species; C: Mx-C sequence similarity analysis among different species圖 3-1 物種間 Mx-A、Mx-B、Mx-C 序列相似性分析-1 Similarity of acids sequences of Mx-A, Mx-B and Mx-C fragments among differentspecies

3-6 Determination of optimal responsed condition by I-ELISA for detection of arDupET-32a-Mx-C McAbs稀釋濃度 作用時間 工作溫度 25ng 過夜 4℃液 碳酸鹽緩沖液(pH 9.6)液 5%脫脂乳-PBST 2h 37℃ 1:2000 1h 37℃ 1:5000 1h 37℃液 TMB 10min 室溫液 1M H2SO45min 室溫交瘤細(xì)胞株的鑒定交瘤細(xì)胞株染色體計數(shù)分析 細(xì)胞的染色體數(shù)正常情況下為 55-65 條，小鼠脾細(xì)胞染色體數(shù)正常情況下為 的 9 株分泌抗鴨 Mx 單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，它們的染色體數(shù)目在 90這 9 株細(xì)胞是小鼠脾細(xì)胞和 SP2/0 成功融合的雜交瘤細(xì)胞，如圖 3-8。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]DHAV-1和DHAV-3感染SPF紹鴨胚M(jìn)x基因表達(dá)差異的研究[D]. 崔嘉琦.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
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本文編號：3591376