鴨坦布蘇病毒感染于2010年在我國(guó)首次爆發(fā),迅速席卷了整個(gè)養(yǎng)鴨密集地區(qū),給我國(guó)養(yǎng)鴨業(yè)造成了巨大損失,目前該病已成為我國(guó)主要鴨病之一。本研究從病毒的生物學(xué)特性、基因組測(cè)序與進(jìn)化分析、實(shí)驗(yàn)室診斷方法的建立以及感染性克隆的構(gòu)建等四個(gè)方面對(duì)鴨坦布蘇病毒進(jìn)行了相關(guān)研究。1、病毒分離鑒定與特性分析從全國(guó)各地發(fā)病的鴨群中分離到十多株鴨坦布蘇病毒,通過(guò)理化特性分析,發(fā)現(xiàn)該病毒不能凝集雞、鴨、鵝和鴿的紅細(xì)胞,對(duì)氯仿和去氧膽酸鈉敏感,對(duì)酸敏感,不耐熱,MgCL2起不到保護(hù)作用。通過(guò)電鏡觀察,我們發(fā)現(xiàn)該病毒為圓形或橢圓形粒子,大小約為50nm。該病毒可通過(guò)雞胚或鴨胚進(jìn)行分離,胚體在72h～120h內(nèi)死亡,胚體水腫,胚肝出血、壞死明顯。該病毒在DEF、Vero、DF-1、BHK-21等細(xì)胞上生長(zhǎng)良好、病變明顯。不同毒株對(duì)CEF的適應(yīng)性存在較大差異,有的毒株盲傳3代就可適應(yīng)CEF,而有的毒株盲傳6代仍不適應(yīng)。動(dòng)物回歸試驗(yàn)顯示,通過(guò)腦內(nèi)、頸部皮下和點(diǎn)眼滴鼻口服三種途徑均能復(fù)制出該病典型的癥狀和病變,但這三種途徑發(fā)病快慢有所差別,腦內(nèi)接種最快,點(diǎn)眼滴鼻口服最慢。2、基因組測(cè)序與進(jìn)化分析我們通過(guò)隨機(jī)引物以及參考其他黃... 

【文章來(lái)源】：揚(yáng)州大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：109 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
符號(hào)說(shuō)明
氨基酸的簡(jiǎn)寫符號(hào)
綜述一 鴨坦布蘇病毒感染研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
綜述二 黃病毒基因組結(jié)構(gòu)與功能的研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
綜述三 正鏈RNA病毒反向遺傳操作技術(shù)研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
第一章 鴨坦布蘇病毒的分離鑒定及特性分析
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結(jié)果與分析
        2.1 病毒分離
        2.2 病毒特性分析
    3 討論
        3.1 病毒的分離鑒定
        3.2 病毒特性分析
    參考文獻(xiàn)
第二章 鴨坦布蘇病毒的基因組測(cè)序和進(jìn)化分析
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結(jié)果與分析
        2.1 隨機(jī)引物擴(kuò)增BZ-10株
        2.2 BZ-10株基因組測(cè)序
        2.3 其他5株病毒基因組測(cè)序
        2.4 鴨坦布蘇病毒基因組特征
        2.5 鴨坦布蘇病毒進(jìn)化地位分析
        2.6 鴨坦布蘇病毒E蛋白結(jié)構(gòu)與進(jìn)化分析
        2.7 不同鴨坦布蘇病毒株的血清交叉中和試驗(yàn)
    3 討論
    參考文獻(xiàn)
第三章 鴨坦布蘇病毒實(shí)驗(yàn)室診斷方法的建立
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結(jié)果與分析
        2.1 RT-PCR檢測(cè)方法
        2.2 熒光定量PCR檢測(cè)方法
        2.3 間接ELISA檢測(cè)方法的建立
    3 討論
    參考文獻(xiàn)
第四章 鴨坦布蘇病毒感染性克隆的構(gòu)建
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結(jié)果與分析
        2.1 基因片段擴(kuò)增
        2.2 全長(zhǎng)cDNA克隆的構(gòu)建
        2.3 RNA體外轉(zhuǎn)染DF-1細(xì)胞
        2.4 RT-PCR方法鑒定
        2.5 間接免疫熒光試驗(yàn)鑒定
        2.6 酶切鑒定
        2.7 子代病毒的接種雞胚
        2.8 子代病毒在DF-1上的TCID_(50)
    3 討論
    參考文獻(xiàn)
全文總結(jié)
附錄
    附錄1：實(shí)驗(yàn)用6株鴨坦布蘇病毒的多聚蛋白氨基酸序列比對(duì)
    附錄2：DNA Marker的分子量
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]鴨坦布蘇病毒E基因的克隆表達(dá)及初步應(yīng)用[J]. 楊少艷,于可響,王華,史玉穎,馬秀麗,李建亮,崔言順.  浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2012(05)
[3]鵝源黃病毒的分離和初步鑒定[J]. 袁生,李金平,王敏儒,白挨泉,蒲文珺,張濟(jì)培,彭巧麗,王輝,陳志偉,張浩吉.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2012(09)
[4]鵝黃病毒JS804株的生物學(xué)特性[J]. 鈕慧敏,李銀,黃欣梅,趙東敏,劉宇卓,張敬峰,劉飛,李彤彤,周曉波,李祥瑞.  江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2012(02)
[5]蟲媒黃病毒NS5蛋白的生物學(xué)功能研究進(jìn)展[J]. 周希珍,趙慧,高嵐,秦成峰.  軍事醫(yī)學(xué). 2012(01)
[6]新型黃病毒在種鵝中垂直傳播的研究[J]. 趙冬敏,黃欣梅,劉宇卓,張敬峰,李銀.  南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2012(01)
[7]鴨坦布蘇病毒研究進(jìn)展[J]. 朱麗萍,顏世敢.  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2012(01)
[8]鴨黃病毒BZ株的生物學(xué)特性研究[J]. 馬秀麗,于可響,高鳳,李玉峰,黃兵,吳靜,秦卓明.  中國(guó)家禽. 2011(21)
[9]一種黃病毒引起鴨產(chǎn)蛋下降的診斷報(bào)告[J]. 張蓉蓉,溫國(guó)元,羅青平,楊峻,王紅琳,羅玲,艾地云,邵華斌.  湖北農(nóng)業(yè)科學(xué). 2011(19)
[10]鴨產(chǎn)蛋下降-死亡綜合征的臨床診斷與病原的初步鑒定[J]. 趙圓圓,李傳峰,朱良強(qiáng),詹松鶴,王漢清,魏建忠,秦愛(ài)建,劉光清,王桂軍.  揚(yáng)州大學(xué)學(xué)報(bào)(農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版). 2011(03)



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