利用原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)并純化獲得藍(lán)舌病病毒NS3蛋白。以NS3重組蛋白作為包被抗原,經(jīng)過(guò)對(duì)包被濃度、樣品稀釋度以及二抗工作濃度和作用時(shí)間等一系列條件的優(yōu)化,建立了一種鑒別藍(lán)舌病野毒感染的間接ELISA抗體檢測(cè)方法。結(jié)果顯示,該方法的檢測(cè)靈敏度可達(dá)1∶1 280,批內(nèi)、批間變異系數(shù)均小于10%,具有良好的重復(fù)性。與商業(yè)化的藍(lán)舌病試劑盒對(duì)比檢測(cè)的結(jié)果顯示,兩者的藍(lán)舌病陽(yáng)性樣品符合率為100%,本試驗(yàn)建立的間接ELISA方法可以區(qū)分藍(lán)舌病自然感染和疫苗免疫動(dòng)物。 

【文章來(lái)源】：中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2020,40(08)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

重組表達(dá)載體pCold-NS3雙酶切擴(kuò)增片段

利用建立的檢測(cè)方法對(duì)26份已知BTV陰性血清和24份免疫血清進(jìn)行檢測(cè),計(jì)算檢測(cè)結(jié)果的平均值 x ˉ = 0.187, 標(biāo)準(zhǔn)方差(s)=0.011,通過(guò)公式進(jìn)一步計(jì)算得到陽(yáng)性閾值PC=0.220,陰性閾值NC=0.209。從而確定檢測(cè)方法的判定標(biāo)準(zhǔn):樣品D450 nm值≥0.220判為陽(yáng)性,即BTV感染;D450 nm值≤0.209判為陰性,BTV滅活疫苗接種或BTV陰性,可通過(guò)商品化的藍(lán)舌病抗體檢測(cè)試劑盒進(jìn)一步確定;0.209<D450nm值<0.220判為可疑,需通過(guò)再一次試驗(yàn)進(jìn)行判定。圖3 Western blot結(jié)果

Western blot結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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