隨著規(guī)�；�、集約化飼養(yǎng)方式的普及,現代牧業(yè)中高產奶牛疾病的疾病增多明顯,嚴重危害奶牛業(yè)健康發(fā)展,而奶牛亞急性瘤胃酸中毒（SARA）是高產奶牛的常見疾病,每年造成巨大損失。奶牛亞急性瘤胃酸中毒時,瘤胃內產生的大量組胺是導致奶牛產生各種炎癥的重要因素。炎性因子COX-2、IL-6、TNF-α及NF-κB信號通路與炎癥的產生密切相關。為研究奶牛瘤胃酸中毒時血液內組胺濃度的變化及對奶牛炎性因子及炎性信號通路的影響,本試驗通過對健康奶牛飼喂高精料日糧,誘發(fā)亞急性瘤胃酸中毒,促使瘤胃內大量產生組胺,手術安裝血管瘺管采集門靜脈和肝靜脈血液樣品,通過檢測血液中組胺含量及COX-2含量,并通過RT-PCR對在體肝臟中的COX-2、NF-κB、IL-6、TNF-α表達水平進行相對定量和絕對定量檢測,為組胺對奶牛炎性信號通路產生的影響提供一定的依據。1.不同日糧精粗比對奶牛組胺和COX-2產生的影響隨機選取6頭泌乳期的成年健康奶牛,隨機分組,采用2×2的拉丁方設計,對兩組奶牛分別飼喂等能等氮的高精料日糧和低精料日糧,誘發(fā)亞急性瘤胃酸中毒,手術安裝血管瘺管采集門靜脈和肝靜脈血液樣品,組胺Elisa試劑盒檢測血... 

【文章來源】：南京農業(yè)大學江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數】：77 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１．由ＯＲＡＩｌ介導的ＮＦ－ｋ?Ｂ信號通路在組胺導致ｃｏｘ－２活化中的作用的圖??示

圖３－１肝靜脈和口靜脈在肝化內的分支??Ｆｉｇ．３－１?Ｂｒａｎｃｈ?ｏｆ?化ｅ?ｈｅｐａｔｉｃ?ｖｅｉｎ?ａｎｄ?ｐｏｒｔａｌ?ｖｅｉｎ?ｉｎ?化ｅ?ｌｉｖｅｒ??樣品的米集??ｌ無菌注射器的針尖剪去０．２?ｃｍ，然后磨平，分別插入巧靜抽掉血管湊內的肝素后，吸取肝靜脈血和口靜脈血，注入真空采血管使注射器內的血液慢慢流入。迅速將真空采血管。超低溫離屯、機４?°Ｃ、３０００?ｒｐｍ離必２０?ｍｉｎ，吸取上清，－２０?ｒ冰箱保存、待測。??組胺濃度的測定??胺濃度測定的方法主要參考牛組胺Ｅｌｉｓａ試劑盒（上�？婆d行，步驟如下；??

３．１?Ｃ０Ｘ－２、ＮＦ－ＫＢ、圧－６和ＴＮＦ?ａ的民Ｔ－ＰＣ民擴增結果??３．?１．１?ＲＮＡ瓊脂糖凝膠電泳??提取總ＲＮＡ瓊脂糖凝膠電泳結果如圖４－１，２８?Ｓ和１８?Ｓ條帶清晰，沒有脫尾現??象，灰度比約為２；?１，表明所提ＲＮＡ完整，質量可靠。同時分光光度計檢測結??果也顯示，在２６０?ｎｍ和２８０?ｎｍＲＮＡ的紫外吸光度比值在１．８－２．０之間，說明ＲＮＡ??無降解，純度較高，可用于后繼相關實驗。??■—２８Ｓ??一??ｉｏｏ??－巧??圖４－１總ＲＮＡ掠脂糖凝膠電泳??Ｆｉｇ?４－１?ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ??３．?１．２?Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ?ＰＣＲ?擴增曲線??由圖４－２至圖４－５可見，各基因的融解曲線均為單峰，無異常峰出現，也沒有??出現主峰的異常增寬；且擴増曲線均呈標準的＂Ｓ＂形。說明試驗ＰＣＲ產物較純、??未出現污染、引物二聚體和非特異性的擴增，可Ｗ進行后續(xù)的定量分析。??．械減??‘?ｆ??—?Ｊ??？?：?＞?？?？?巧：巧??ＳＭ??儀曲Ｊ！擬Ｗ泌ＵＷ卽ｆ撲‘＂Ｓ??４４??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]組胺及組胺受體對免疫系統(tǒng)調節(jié)作用[J]. 鐘斐,蔣瑾瑾.  中華臨床醫(yī)師雜志(電子版). 2013(21)
[2]奶牛日糧中物理有效中性洗滌纖維作用的研究進展[J]. 王炳,申軍士,葉均安,劉建新.  中國畜牧雜志. 2013(19)
[3]奶牛亞急性瘤胃酸中毒及其防治[J]. 錢春艷.  中國畜牧獸醫(yī)文摘. 2013(06)
[4]組胺H4受體基因多態(tài)性與結腸癌的相關性[J]. 王紅珊,李國豪,曹毅敏,林美儀,關愛萍,臧林泉.  中國老年學雜志. 2012(13)
[5]奶牛亞急性瘤胃酸中毒的診斷及防治[J]. 加合甫·艾迪西.  新疆畜牧業(yè). 2012(02)
[6]奶牛蹄葉炎的病因探究[J]. 崔海,李旭.  中國奶牛. 2012(03)
[7]iNOS/COX-2與惡性腫瘤[J]. 王菊勇,郭凈,鄭展.  現代腫瘤醫(yī)學. 2012(01)
[8]亞急性瘤胃酸中毒診斷方法研究進展[J]. 徐俊,周凌云,姜雅慧,孫鵬,沈維軍,楊永新.  華北農學報. 2011(S1)
[9]NF-κB、Bcl-2與酒精性肝病[J]. 張曦,王沁.  胃腸病學和肝病學雜志. 2011(07)
[10]NF-κB國外最新研究進展[J]. 劉海楠,陳雷,高彥宏.  臨床合理用藥雜志. 2011(07)

博士論文
[1]奶牛蹄底潰瘍發(fā)病機理和治療試驗研究[D]. 羅安智.中國農業(yè)大學 2005

碩士論文
[1]肥胖與非肥胖2型糖尿病患者外周血C-反應蛋白、腫瘤壞死因子-α和白介素-1β水平的比較研究[D]. 王露.中國醫(yī)科大學 2006
[2]南京地區(qū)奶牛隱性乳房炎流行調查與病原分析及PCR檢測[D]. 鄭浩.南京農業(yè)大學 2004



本文編號：3573593