將TZ060107株新城疫病毒（NDV）在CEF細胞上傳代，對其HN基因和F基因分別進行擴增、克隆、測序。測序結(jié)果表明，所擴增的HN基因全長1801bp，編碼區(qū)由1716bp組成，共編碼571個氨基酸；所擴增的F基因全長是1725bp，編碼區(qū)由1662bp組成，共編碼553個氨基酸。第一個循環(huán)，TZ060107株新城疫病毒（NDV）在含有抗TZ060107抗體的雞胚成纖維細胞（CEF）上傳代，分3個獨立系列連傳50代，同時設3個不帶抗體的獨立系列也連傳50代，每10代擴增HN基因和F基因并測序。第二輪循環(huán)所用的起始毒株是第50代中變異最大的A1-50系列毒株。將A1-50接種10日齡SPF雞胚，用該尿囊液制成油乳劑滅活苗。免疫SPF雞，2周后再次免疫，第二次免疫十天后采集抗血清。對抗血清進行病毒中和試驗，根據(jù)中和試驗結(jié)果確定最適血清添加濃度為1:20，用該濃度添加血清到有抗體組形成免疫選擇壓。將A1-50毒株在含有抗A1-50抗體的CEF培養(yǎng)上分3個獨立系列連傳50代，分別為a1、a2、a3。同時設3個不帶抗體的獨立傳代系列作為對照，分別為b1、b2、b3。對第60、70、80、90、... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學山東省

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
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中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 病原和生物學特性
        1.1.1 形態(tài)結(jié)構(gòu)
        1.1.2 理化性質(zhì)
        1.1.3 培養(yǎng)特性
        1.1.4 生物學特性
        1.1.5 抗原性和毒力
    1.2 基因組結(jié)構(gòu)和功能
        1.2.1 基因組結(jié)構(gòu)
        1.2.2 基因組結(jié)構(gòu)蛋白
    1.3 致病性
        1.3.1 致病性的概述
        1.3.2 致病性的分子基礎
    1.4 流行病學
        1.4.1 流行病學概況和特點
        1.4.2 易感動物
        1.4.3 傳播途徑和流行方式
        1.4.4 我國新城疫流行趨勢
    1.5 免疫
        1.5.1 新城疫免疫
        1.5.2 免疫和疫苗的關系
    1.6 免疫選擇壓對病毒的影響
        1.6.1 RNA 病毒的易變異性
        1.6.2 免疫選擇壓發(fā)揮作用的客觀指標
        1.6.3 免疫選擇壓相關的研究成果
        1.6.4 免疫選擇壓對病毒抗原性的影響
    1.7 本研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 病毒
        2.1.2 SPF 雞和 SPF 雞胚
        2.1.3 主要分子生物學試劑和試劑盒
        2.1.4 細胞培養(yǎng)相關材料
        2.1.5 引物
    2.2 方法
        2.2.1 病毒和細胞
        2.2.2 抗NDVA1 -50 單因子血清的制備
        2.2.3 最適血清添加濃度的確定
        2.2.4 病毒在 CEF 細胞上的傳代
        2.2.5 病毒 HN基因和 F 基因的擴增克隆測序
        2.2.6 病毒間的交叉HI 試驗
3 結(jié)果
    3.1 最適血清添加濃度的確定
    3.2 PCR 結(jié)果（見圖 3-1 和圖 3-2）
    3.3 抗體選擇壓作用下 HN 基因和 F基因的變異結(jié)果
        3.3.1 HN 基因和 F 基因的遺傳穩(wěn)定性
        3.3.2 后 50代 HN 基因和 F 基因核苷酸序列比較結(jié)果（詳見附錄）
        3.3.3 抗體選擇壓下新城疫病毒 HN 基因的變異
        3.3.4 抗體選擇壓下新城疫病毒 F基因的變異
    3.4 交叉 HI試驗結(jié)果和抗原性變化
        3.4.1 第一組實驗結(jié)果
        3.4.2 第二組實驗結(jié)果
4 討論
    4.1 抗體選擇壓作用下 H N 基因的變異
    4.2 抗體選擇壓作用下 F基因的變異
    4.3 新城疫病毒抗原性的變異
5. 結(jié)論
附圖
參考文獻
個人簡介
碩士期間發(fā)表論文情況
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]抗體選擇壓作用下H9N2亞型禽流感病毒NA基因的變異[J]. 杜燕,婁本紅,武專昌,趙鵬,崔治中.  病毒學報. 2012(01)
[2]豬繁殖與呼吸綜合征病毒在抗體免疫選擇壓下的變異[J]. 趙鵬,馬誠太,崔治中.  中國科學:生命科學. 2010(10)
[3]細胞培養(yǎng)上新城疫病毒HN基因在抗體免疫選擇壓作用下的抗原表位變異[J]. 鞏艷艷,崔治中.  中國科學（C輯:生命科學）. 2009(12)
[4]抗體選擇壓作用下H9N2亞型禽流感病毒HA基因的變異[J]. 婁本紅,朱秀同,孫貝貝,崔治中.  微生物學報. 2009(07)
[5]新城疫病毒貴州分離株F基因的克隆和序列分析[J]. 伍祥龍,溫貴蘭,袁翠霞,周碧君,文明,李永明.  動物醫(yī)學進展. 2008(07)
[6]雞新城疫的流行特點及防治[J]. 王占林.  現(xiàn)代畜牧獸醫(yī). 2008(07)
[7]新城疫疫苗的研究進展[J]. 葛鑫,路學華,劉懷然,閆麗輝,劉培欣,孔憲剛,馮新暢.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2008(02)
[8]雞胚中新城疫強毒的分離、鑒定與生物學特性研究[J]. 孫淑紅,崔治中.  畜牧獸醫(yī)學報. 2007(07)
[9]雞新城疫疫苗研究進展[J]. 王賀民,秦素琴,魏濤.  中國家禽. 2006(18)
[10]新城疫病毒HN和F基因遺傳變異相關性的研究[J]. 秦卓明,馬保臣,何葉峰,王友令,崔治中,徐懷英,袁小遠.  微生物學報. 2006(02)



本文編號：3572347