間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells,MSCs）是在體內(nèi)間質(zhì)中存在的成體干細(xì)胞。在適當(dāng)?shù)捏w內(nèi)或體外條件下,MSCs可以分化成多種細(xì)胞類型。皮膚和關(guān)節(jié)損傷是犬的常發(fā)疾病,給犬帶來病痛,嚴(yán)重影響犬的生活質(zhì)量。干細(xì)胞治療作為一種新興治療手段在組織再生和損傷組織修復(fù)方面表現(xiàn)出良好治療效果,而MSCs是目前應(yīng)用最廣泛的成體干細(xì)胞。為研究MSCs對犬的皮膚創(chuàng)傷和關(guān)節(jié)損傷的修復(fù)作用,本研究開展了以下實(shí)驗(yàn):1.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs）和臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（Umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs）生物學(xué)特性研究。本實(shí)驗(yàn)通過Ficoll密度梯度分離法分離獲得BM-MSCs,采用Ⅰ型膠原酶消化法從臍帶華通膠中分離獲得UC-MSCs,對分離獲得的兩種細(xì)胞進(jìn)行離體培養(yǎng)和生物學(xué)特性的研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn),BM-MSCs和UC-MSCs的生長特性相似,細(xì)胞均呈貼壁生長、形態(tài)為長梭形,排列有明顯方向性、呈漩渦狀或網(wǎng)狀、折光性強(qiáng),傳至第9代仍保持良好的生長活性,群體倍增時間隨... 

【文章來源】：佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院廣東省

【文章頁數(shù)】：84 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
本文常用英文縮寫詞
前言
    1 MSCs的研究進(jìn)展
        1.1 MSCs的基本生物學(xué)特性
        1.2 犬MSCs的來源與制備
            1.2.1 骨髓來源MSCs
            1.2.2 脂肪來源MSCs
            1.2.3 胎盤來源MSCs
        1.3 MSCs治療的優(yōu)勢
    2 MSCs對皮膚創(chuàng)傷治療的研究進(jìn)展
    3 MSCs對骨關(guān)節(jié)炎治療的研究進(jìn)展
        3.1 骨關(guān)節(jié)炎(Osteoarthritis,OA)
        3.2 MSCs治療OA的作用途徑
            3.2.1 MSCs通過促進(jìn)軟骨及周邊組織的恢復(fù)改善OA
            3.2.2 MSCs通過旁分泌作用抑制炎癥反應(yīng)來改善OA
    4 MSCs對其它一些疾病治療的研究進(jìn)展
    5 MSCs存在問題和展望
第一章 犬骨髓和臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性研究
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 材料
            2.1.1 實(shí)驗(yàn)動物和材料
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器設(shè)備
            2.1.4 主要溶液的配制
        2.2 方法
            2.2.1 犬BM-MSCs的制備
            2.2.2 犬UC-MSCs的制備
            2.2.3 不同代數(shù)的犬BM-MSCs和 UC-MSCs生長曲線繪制
            2.2.4 犬BM-MSCs和 UC-MSCs的鑒定
    3 結(jié)果
        3.1 犬BM-MSCs的生長特性
        3.2 犬UC-MSCs的生長特性
        3.3 第3、6、9 代犬BM-MSCs和 UC-MSCs的增殖情況
        3.4 犬BM-MSCs的鑒定
            3.4.1 犬BM-MSCs可誘導(dǎo)分化成脂細(xì)胞
            3.4.2 犬BM-MSCs可誘導(dǎo)分化成骨細(xì)胞
            3.4.3 犬BM-MSCs的CD34、CD44 免疫熒光鑒定結(jié)果
        3.5 犬UC-MSCs的鑒定
            3.5.1 犬UC-MSCs可誘導(dǎo)分化成成脂細(xì)胞和成骨細(xì)胞
            3.5.2 犬UC-MSCs的CD34、CD44 免疫熒光鑒定結(jié)果
    4 討論
        4.1 BM-MSCs和 UC-MSCs分離方法
        4.2 BM-MSCs和 UC-MSCs的生物學(xué)特性
第二章 犬BM-MSCs移植修復(fù)皮膚創(chuàng)傷的研究
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 材料
            2.1.1 實(shí)驗(yàn)動物
            2.1.2 手術(shù)器械及實(shí)驗(yàn)藥品
            2.1.3 主要試劑
            2.1.4 主要儀器設(shè)備
        2.2 方法
            2.2.1 犬BM-MSCs的制備
            2.2.2 犬皮膚創(chuàng)傷模型的建立
            2.2.3 犬BM-MSCs的局部注射治療
            2.2.4 創(chuàng)口評估
        2.3 統(tǒng)計學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 犬局部注射BM-MSCs后創(chuàng)面的觀察
        3.2 傷口面積及愈合速度比較
    4 討論
第三章 三種不同來源MSCs及其外泌體對軟骨細(xì)胞增殖的影響
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 材料
            2.1.1 實(shí)驗(yàn)動物
            2.1.2 主要試劑用品
            2.1.3 主要儀器設(shè)備
        2.2 方法
            2.2.1 犬AC的制備
            2.2.2 Ⅱ型膠原的免疫組織化學(xué)染色鑒定
            2.2.3 UC-MSCs來源的外泌體的制備
            2.2.4 三種來源MSCs及 EXO對 AC增殖的影響
            2.2.5 UC-MSCs來源的外泌體與非外泌體部分對軟骨細(xì)胞增殖影響
    3 結(jié)果
        3.1 AC的生長特性
        3.2 Ⅱ型膠原的免疫組織化學(xué)染色鑒定
        3.3 三種來源MSCs及兩種不同來源EXO對 AC增殖的影響
        3.4 UC-MSC來源的EXO與 EXOCM對軟骨細(xì)胞增殖影響
    4 討論
        4.1 MSCs能顯著促進(jìn)AC的增殖
        4.2 MSCs的外泌體及非外泌體部分均能促進(jìn)AC的增殖
第四章 犬UC-MSCs移植治療膝關(guān)節(jié)軟骨損傷的療效觀察
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 材料
            2.1.1 實(shí)驗(yàn)動物
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器設(shè)備
            2.1.4 主要溶液配制
        2.2 方法
            2.2.1 犬UC-MSCs的制備
            2.2.2 犬OA模型的建立
            2.2.3 膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射UC-MSCs治療OA
            2.2.4 體溫檢測
            2.2.5 采血
            2.2.6 MRI、B超、X線等影像學(xué)方法觀察試驗(yàn)犬患肢情況
            2.2.7 病理學(xué)組織觀察
        2.3 統(tǒng)計學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 飲食及運(yùn)動情況
        3.2 體溫變化情況
        3.3 血常規(guī)檢測結(jié)果
        3.4 生化指標(biāo)檢測結(jié)果
        3.5 炎性因子檢測結(jié)果
        3.6 MRI檢查結(jié)果
        3.7 B超檢查結(jié)果
        3.8 X線檢查結(jié)果
        3.9 病理學(xué)組織觀察
            3.9.1 膝關(guān)節(jié)組織的肉眼觀察
            3.9.2 石蠟切片對比觀察新生軟骨組織
            3.9.3 掃描電鏡觀察軟骨和髕骨組織結(jié)果
    4 討論
        4.1 UC-MSC能通過促進(jìn)軟骨修復(fù)治療OA
        4.2 UC-MSC能通過抑制炎癥反應(yīng)治療OA
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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本文編號：3571212