本論文旨在通過檢測Wnt/β-catenin信號通路相關(guān)基因mRNA在絨山羊絨毛周期性再生及著色過程中的表達，為進一步探究并闡明Wnt/β-catenin信號通路在絨毛周期性再生及著色過程中的作用及分子機理奠定基礎(chǔ)。本論文克隆Wnt/β-catenin信號通路中與毛干長度相關(guān)的基因Wnt3，并對其核苷酸、編碼氨基酸序列進行生物信息學分析及原核表達；采取實時熒光定量技術(shù)對Wnt/β-catenin信號通路上游基因Wnt3、β-catenin、Lef1/Tcf3及Dkk1基因mRNA在白色絨山羊絨毛生長不同時期及黑、白色絨山羊絨毛生長旺盛期時體側(cè)部皮膚組織中的相對表達量進行測定；采用實時熒光定量技術(shù)對Wnt/β-catenin信號通路中與毛色相關(guān)的靶基因MITF、ASIP及TYR家族基因mRNA在黑、白絨山羊絨毛生長旺盛時體側(cè)部皮膚組織中的表達量進行檢測。試驗結(jié)果如下：（1）絨山羊Wnt3基因CDS區(qū)全長1068bp，共編碼355個氨基酸；不同物種間Wnt3基因CDS區(qū)序列相似性極高（90%以上）；編碼多肽分子式為C1733H2688N508O510S29,分子量約為40kDa，等電點為7... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 調(diào)控毛囊生長發(fā)育信號通路研究進展
    1.1 前言
    1.2 毛囊生理學
    1.3 調(diào)控毛囊發(fā)育相關(guān)通路研究進展
        1.3.1 Wnt/β-catenin 信號通路
        1.3.2 BMP 信號通路
        1.3.3 SHH 信號通路
        1.3.4 Notch 信號通路
    1.4 研究問題的提出及擬解決的問題
        1.4.1 研究問題的提出
        1.4.2 本文擬研究的問題
第二章 Wnt3 基因 CDS 區(qū)克隆、生物信息分析及原核表達
    2.1 材料與試劑
        2.1.1 試驗材料
        2.1.2 實驗試劑與菌株
        2.1.3 主要實驗儀器
    2.2 Wnt3 基因 CDS 區(qū)克隆
        2.2.1 皮膚組織 RNA 的提取及質(zhì)量、濃度檢測
        2.2.2 第一鏈 cDNA 的合成
        2.2.3 Wnt3 基因 CDS 區(qū)克隆引物設計
        2.2.4 RT-PCR 擴增絨山羊 Wnt3 基因 CDS 區(qū)
        2.2.5 絨山羊 Wnt3 基因 CDS 區(qū)的電泳檢測
        2.2.6 絨山羊 Wnt3 基因 CDS 區(qū)克隆及測序
        2.2.7 Wnt3 基因 CDS 區(qū)及編碼蛋白質(zhì)生物信息學分析
    2.3 絨山羊 Wnt3 基因編碼蛋白的原核表達
        2.3.1 Wnt3 原核表達引物的設計
        2.3.2 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.3.3 絨山羊 Wnt3 基因編碼蛋白的誘導原核表達及檢測
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 皮膚組織總 RNA 的提取
        2.4.2 Wnt3 基因 CDS 區(qū)的克隆
        2.4.3 絨山羊 Wnt3 基因及其編碼氨基酸生物信息學分析
        2.4.4 Wnt3 基因的原核表達
    2.5 討論
    2.6 小結(jié)
第三章 Wnt/β-catenin 信號通路上游基因在絨毛周期性再生及著色過程中表達分析
    3.1 材料和方法
        3.1.1 樣品采集
        3.1.2 主要試劑與儀器
        3.1.3 皮膚組織總 RNA 提取及 cDNA 第一鏈合成
        3.1.4 Wnt/β-catenin 通路上游基因在不同月份絨山羊皮膚組織中的表達
        3.1.5 Wnt/β-catenin 通路上游基因在不同毛色絨山羊皮膚組織中的表達
        3.1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 Wnt/β-catenin 信號通路上游基因在不同月份絨山羊皮膚中的表達
        3.2.2 Wnt/β-catenin 信號通路上游基因在不同毛色絨山羊皮膚中的表達
    3.3 討論
        3.3.1 Wnt/β-catenin 信號通路在絨山羊絨毛周期性再生的作用
        3.3.2 Wnt/β-catenin 信號通路在絨山羊絨毛著色過程中的作用
    3.4 小結(jié)
第四章 MITF、ASIP 及 TYR 家族基因在黑色和白色絨山羊皮膚組織中的表達
    4.1 材料和方法
        4.1.1 試驗材料
        4.1.2 主要試劑與儀器
        4.1.3 皮膚組織總 RNA 提取及 cDNA 第一鏈合成
        4.1.4 MITF、ASIP 及 TYR 家族等基因在不同毛色絨山羊皮膚組織中的表達
        4.1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 皮膚組織 RNA 的提取
        4.2.2 MITF、ASIP 及 TYR 家族基因在不同毛色絨山羊皮膚組織中的表達
    4.3 討論
        4.3.1 MITF 基因 mRNA 表達量與絨毛顏色關(guān)系
        4.3.2 ASIP 基因 mRNA 表達量與絨毛顏色關(guān)系
        4.3.3 TYR 家族基因 mRNA 表達與絨毛顏色關(guān)系
    4.4 小結(jié)
結(jié)論
    5.1 結(jié)論
    5.2 需要進一步研究的問題
參考文獻
附錄
    附錄 1 皮膚組織 RNA 的提取
    附錄 2 cDNA 第一鏈合成
    附錄 3 凝膠回收
    附錄 4 感受態(tài)細胞制備
    附錄 5 TA 克隆
    附錄 6 質(zhì)粒提取
    附錄 7 誘導原核表達
    附錄 8 SDS-PAGE 凝膠電泳
致謝
作者簡介


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3563072