本實(shí)驗(yàn)以小尾寒羊?yàn)閷?shí)驗(yàn)動物研究由金黃色葡萄球菌引起的乳房炎,探究TLRs和CK的表達(dá)及與乳房炎之間的關(guān)系。利用實(shí)時熒光定量PCR方法（FQ RT-PCR）檢測TLRs基因在感染金黃色葡萄球菌后12 h、24 h、36 h、48 h和72 h的乳腺組織及外周血白細(xì)胞中的相對表達(dá)量;用Western-blot方法檢測感染金黃色葡萄球菌12 h、24 h、36 h、48 h、72 h后,TLRs蛋白在小尾寒羊乳腺組織中的表達(dá)情況;用ELISA法檢測血清中TNF-α、IFN-α、IL-1β、IL-16的濃度。結(jié)果表明:TLRs在感染后的乳腺組織及外周血白細(xì)胞中差異表達(dá)。感染后的外周血白細(xì)胞中,TLR8未表達(dá),TLR2在12 h的表達(dá)量顯著升高;TLR6、TLR7在48 h的表達(dá)量顯著升高;TLR1、TLR3、TLR4的表達(dá)量均低于對照組;TLR9在12 h和24 h以及TLR5、10在12 h的表達(dá)量無差異,其余時間段的表達(dá)量低于對照組。感染后的乳腺組織中,除TLR8和TLR9無表達(dá)外,其它TLRs均表達(dá)。TLR2在各時段的表達(dá)量均高于對照組,在12 h、24 h和36 h的表達(dá)量顯著升高;T... 

【文章來源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

外周血白細(xì)胞中TLR1~10基因的PCR檢測Fig1ThePCRdetectionofTLR1~10geneinPeripheralbloodleukocyte

圖 2-1 外周血白細(xì)胞中 TLR1~10 基因的 PCR 檢測Fig 1 The PCR detection of TLR1~10 gene in Peripheral blood leDL750 分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；1~10 分別代表的是 TLR1~TLR10 的擴(kuò)增產(chǎn)物DL750 DNALadder;1~10 respective the products amplified of TLR1 to TLR10 TLR1~10 基因進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測，可段大小一致的電泳條帶。由圖 2-1 可以看出感染金黃色葡萄球菌后小細(xì)胞中除 TLR8 無條帶，其余 TLRs 均出現(xiàn)強(qiáng)弱不同的條帶。

甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018 屆碩士畢業(yè)生2.2 TLRs 的溶解曲線熒光定量PCR常用于基因定量和準(zhǔn)確定量目的基因的表達(dá)，不僅可以實(shí)時檢測的產(chǎn)物量，還可以通過溶解曲線識別擴(kuò)增產(chǎn)物的單一性和引物二聚體。利用 ABI熒光定量 PCR 儀分別將 TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR7、TLR9、T及β-actin 進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增 40 個循環(huán)后，溶解曲線有單一峰，目的性產(chǎn)物的特異性較（如圖 2-3 所示）

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]金黃色葡萄球菌對小尾寒羊乳腺組織TLR2表達(dá)的影響[J]. 馬小軍,陳富強(qiáng),張小麗,李發(fā)弟,唐然,張晨,宋曉育,張欣.  華北農(nóng)學(xué)報. 2016(05)
[2]甘肅省定西市安定區(qū)舍飼小尾寒羊乳房炎流行現(xiàn)狀與對策[J]. 趙繼紅.  北京農(nóng)業(yè). 2015(29)
[3]慢性阻塞性肺疾病血漿IL-16、TNF-α和FIB的表達(dá)[J]. 張文輝,陳永鳳,左麗娜,孫思,顧翔.  臨床肺科雜志. 2014(12)
[4]牦牛TLR6基因的克隆、序列分析及其表達(dá)分布研究[J]. 林寶山,蘭道亮,黃偲,陳亞冰,張雁,王英,李鍵.  東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2014(07)
[5]支氣管哮喘患兒IL-16的測定及臨床診斷意義[J]. 劉兵.  中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué). 2013(07)
[6]p38MAPK信號途徑抑制劑SB203580對大鼠重癥急性胰腺炎胰腺組織中TNF-α表達(dá)的調(diào)控作用[J]. 江濤,方茂勇.  肝膽外科雜志. 2013(03)
[7]乳腺癌組織TLR4蛋白表達(dá)及與細(xì)胞凋亡和增殖的關(guān)系[J]. 呂寶軍,張紅雨,王曉鴻,茍新敏.  中華普通外科學(xué)文獻(xiàn)(電子版). 2011(03)
[8]Toll樣受體介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及其調(diào)控分子的研究進(jìn)展[J]. 曾爽,何小兵,陳國華,房永祥,賈懷杰,景志忠.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2011(04)
[9]IL-1β和TNF-α表達(dá)量與新生兒缺血缺氧性腦病腦損傷程度的相關(guān)性[J]. 閻雯,黃妮娜,賈小芳,楊雪峰.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2010(07)
[10]復(fù)發(fā)性單純皰疹患兒外周血Toll樣受體和細(xì)胞因子的變化[J]. 湯建萍,孫磊.  中國當(dāng)代兒科雜志. 2009(09)

博士論文
[1]TOLL樣受體4/核轉(zhuǎn)錄因子-κB信號通路在脂多糖誘導(dǎo)奶牛乳腺炎癥反應(yīng)中的作用[D]. 吳潔.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016

碩士論文
[1]TLR2、TLR4基因在小尾寒羊乳房炎乳腺組織中表達(dá)的研究[D]. 陳富強(qiáng).甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[2]游泳運(yùn)動對小鼠脾臟TLR2、TLR4誘導(dǎo)表達(dá)作用的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 吳嬪赟.蘇州大學(xué) 2011
[3]TLR2基因多態(tài)性及其與奶牛乳房炎的相關(guān)分析[D]. 劉利.吉林大學(xué) 2009
[4]耐多藥結(jié)核分枝桿菌感染巨噬細(xì)胞對Toll樣受體2、4的調(diào)節(jié)作用[D]. 任衛(wèi)聰.北京市結(jié)核病胸部腫瘤研究所 2009
[5]上海地區(qū)奶牛乳房炎主要致病菌分析及基因治療初探[D]. 易明梅.上海交通大學(xué) 2008



本文編號：3560806