鴨病毒性腸炎（Duck Viral Enteritis，DVE），又名鴨瘟（Duck Plague，DP），是由鴨腸炎病毒（Duck enteritis virus，DEV）引起的常見于鴨、鵝和其他雁形目禽類的一種急性、熱性、敗血性、高度接觸性傳染病。主要特征是損傷血管、引起消化道黏膜出血壞死、淋巴器官和實質(zhì)性臟器出現(xiàn)退行性病變。發(fā)病率和死亡率都很高，給養(yǎng)鴨業(yè)帶來了巨大損失。目前預(yù)防和控制DVE的主要措施是疫苗免疫，而研究病毒在動物機(jī)體中的分布與增殖規(guī)律是闡明病毒致病機(jī)理和免疫機(jī)理的重要基礎(chǔ)，因此有必要建立分子生物學(xué)方法研究DEV強(qiáng)毒和弱毒在感染鴨體內(nèi)的動態(tài)分布規(guī)律，以闡明DEV強(qiáng)毒的致病機(jī)理，同時為進(jìn)一步合理、有效利用疫苗預(yù)防鴨瘟提供依據(jù)。本試驗根據(jù)DEV CSC強(qiáng)毒株及其傳代致弱毒株DEV p80的基因序列差異，建立了檢測鴨瘟強(qiáng)、弱毒通用型和鴨瘟強(qiáng)、弱毒鑒別型兩種SYBR GreenⅠ實時熒光定量PCR方法。結(jié)果顯示，兩種方法建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線均具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均為1.0，熔解曲線分析均為特異性單峰，Tm分別為80.5±0℃、81.5±0℃，并且與正常鴨組織以及其他禽源病毒... 

【文章來源】：中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所北京市

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第一章 引言
    1.1 鴨病毒性腸炎研究進(jìn)展
        1.1.1 歷史
        1.1.2 病原學(xué)
        1.1.3 流行病學(xué)
        1.1.4 分子生物學(xué)進(jìn)展
        1.1.5 診斷方法
        1.1.6 疫苗預(yù)防
    1.2 熒光定量 PCR 研究進(jìn)展
        1.2.1 實時熒光定量 PCR 技術(shù)簡介
        1.2.2 實時熒光定量 PCR 的分類
        1.2.3 實時熒光定量 PCR 的幾個重要概念
        1.2.4 SYBR Green 實時熒光定量 PCR 原理
        1.2.5 在動物傳染病診斷上的應(yīng)用
    1.3 技術(shù)路線
    1.4 本研究目的與意義
第二章 鴨腸炎病毒 SYBR GreenⅠ實時熒光定量 PCR 檢測方法的建立
    摘要
    2.1 試驗材料
        2.1.1 病毒和菌株
        2.1.2 試驗動物
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要試劑配制方法
        2.1.5 主要儀器設(shè)備
        2.1.6 試驗用材料
    2.2 試驗方法
        2.2.1 病毒繁殖
        2.2.2 引物設(shè)計
        2.2.3 模板制備
        2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)品的制備
        2.2.5 熒光定量引物的設(shè)計與合成
        2.2.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
        2.2.7 特異性試驗
        2.2.8 重復(fù)性試驗
        2.2.9 敏感性試驗
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 gD 基因 PCR 擴(kuò)增結(jié)果
        2.3.2 gI 基因 PCR 擴(kuò)增結(jié)果
        2.3.3 標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒 pMD18T-gD 鑒定結(jié)果
        2.3.4 標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒 pMD18T-gI 鑒定結(jié)果
        2.3.5 標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒 pMD18T-gD、pMD18T-gI 的測序結(jié)果
        2.3.6 熒光定量引物的驗證
        2.3.7 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
        2.3.8 特異性實驗
        2.3.9 重復(fù)性實驗
        2.3.10 敏感性實驗
    2.4 討論
    2.5 結(jié)論
第三章 DEV 強(qiáng)、弱毒在感染鴨體內(nèi)的動態(tài)分布研究
    摘要
    3.1 試驗材料
        3.1.1 毒株
        3.1.2 試驗動物
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 主要試劑配制方法
        3.1.5 主要儀器
        3.1.6 試驗用材料
    3.2 試驗方法
        3.2.1 試驗動物處理
        3.2.2 樣品采集及處理方法
        3.2.3 樣品 DNA 的提取
        3.2.4 樣品 DNA 檢測
        3.2.5 試驗結(jié)果的數(shù)據(jù)分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 DEV 強(qiáng)毒 CSC 株在接種鴨體內(nèi)的動態(tài)分布
        3.3.2 DEV 弱毒 p80 株在免疫鴨體內(nèi)的動態(tài)分布
    3.4 討論
        3.4.1 關(guān)于 DEV 強(qiáng)毒 CSC 株在感染鴨體內(nèi)的動態(tài)分布和增殖規(guī)律
        3.4.2 關(guān)于 DEV 弱毒 p80 株在免疫鴨體內(nèi)的動態(tài)分布和增殖規(guī)律
    3.5 結(jié)論
第四章 DEV 強(qiáng)毒 CSC 株在 p80 株免疫鴨泄殖腔排毒規(guī)律的研究
    摘要
    4.1 試驗材料
        4.1.1 毒株
        4.1.2 試驗動物
        4.1.3 主要試劑
        4.1.4 主要試劑配制方法
        4.1.5 主要儀器
        4.1.6 試驗用材料
    4.2 試驗方法
        4.2.1 試驗動物處理
        4.2.2 樣品采集及處理方法
        4.2.3 樣品 DNA 的提取
        4.2.4 樣品 DNA 的檢測
        4.2.5 試驗結(jié)果的數(shù)據(jù)分析
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 DEVp80 弱毒免疫鴨攻毒 14 d 后死亡情況
        4.3.2 泄殖腔排毒情況
    4.4 討論
        4.4.1 DEVp80 弱毒免疫鴨攻毒 14 d 后死亡情況
        4.4.2 DEVp80 弱毒免疫鴨攻毒后排毒量檢測
    4.5 結(jié)論
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄
作者簡歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬繁殖與呼吸綜合征病毒SYBR GreenⅠ實時熒光定量PCR檢測方法的建立[J]. 吳憶春.  動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2013(02)
[2]應(yīng)用SYBR GreenⅠ熒光定量PCR方法檢測人工感染雛鴨體內(nèi)DEV NP基因表達(dá)水平[J]. 楊穎,夏夢,殷俊磊,杜海燕,周碧君,文明.  浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2011(04)
[3]鴨瘟病毒疫苗株在免疫SPF鴨體內(nèi)的生長動力學(xué)檢測[J]. 張新富,胡永浩,柳金雄,陳普成,鄔麗,姜永萍,陳化蘭.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2011(05)
[4]SYBR Green Ⅰ實時熒光定量RT-PCR檢測禽呼腸孤病毒δC和δNS基因方法的建立[J]. 熊文婕,謝芝勛,唐熠,謝麗基,劉加波,龐耀姍,鄧顯文,謝志勤.  廣西農(nóng)業(yè)科學(xué). 2010(04)
[5]熒光定量RT-PCR鑒別IBDV超強(qiáng)毒株與經(jīng)典疫苗毒株[J]. 汪振興,李樹清,孫建和.  上海交通大學(xué)學(xué)報(農(nóng)業(yè)科學(xué)版). 2009(02)
[6]雞傳染性法氏囊病病毒實時熒光定量RT-PCR檢測方法的建立[J]. 王永強(qiáng),祁小樂,高宏雷,高玉龍,宇文延青,林歡,秦立廷,宋修慶,王笑梅.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2009(01)
[7]應(yīng)用TaqMan-MGB探針FQ-PCR探討鴨瘟弱毒苗在鴨體內(nèi)的分布及排泄規(guī)律[J]. 齊雪峰,程安春,汪銘書,楊曉燕,郭宇飛,陳孝躍.  中國獸醫(yī)學(xué)報. 2008(07)
[8]短發(fā)夾結(jié)構(gòu)RNA對口蹄疫病毒2B基因瞬時表達(dá)的抑制[J]. 崔麗瑾,王興龍,任林柱,伍曉慧,郎需龍,張輝,梅英武,李曉燕,卜朝陽.  中國獸醫(yī)學(xué)報. 2008(05)
[9]小干擾RNA（siRNA）對馬立克氏病淋巴瘤細(xì)胞chTERT基因表達(dá)的抑制[J]. 鄒亞學(xué),孫瑩,潘風(fēng)光,鄭梅竹,艾永興,張玉靜.  中國獸醫(yī)學(xué)報. 2008(02)
[10]鴨瘟病毒部分基因的克隆與序列分析[J]. 李玉峰,歐陽文軍,周秋平,黃兵,馬秀麗,宋敏訓(xùn),楊漢春.  中國獸醫(yī)雜志. 2007(03)

博士論文
[1]表達(dá)AIV H7HA和H9HA基因重組鴨瘟病毒載體的構(gòu)建與DNA疫苗研究[D]. 邢明偉.東北林業(yè)大學(xué) 2007
[2]鴨腸炎病毒部分基因組序列的克隆與分析[D]. 陳淑紅.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006
[3]鴨病毒性腸炎病毒CH強(qiáng)毒株部分生物學(xué)特性的研究及熒光實時定量PCR檢測方法的建立和應(yīng)用[D]. 郭宇飛.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005



本文編號：3551805