以鴨胚尿囊腔途徑增殖鴨腺病毒,24-120 h死亡鴨胚和120 h后未死亡鴨胚置4℃冰箱過夜,無菌操作分別收集尿囊液。對鴨腺病毒連續(xù)傳代,選擇傳代穩(wěn)定的鴨胚尿囊液作為種毒,種毒鴨胚半數(shù)感染量為10-751/0.2ml, HA價1：216。用種毒制備疫苗抗原,加0.3%甲醛、37℃滅活48 h,加蜂膠佐劑,制備鴨腺病毒蜂膠滅活苗,蜂膠最終含量10mg/ml,疫苗安全檢驗合格。建立了間接ELISA法檢測鴨腺病毒抗體。ELISA最佳反應條件為：鴨腺病毒抗原包被濃度2.45μg/ml,血清稀釋倍數(shù)1：100,作用時間90 min。HRP-羊抗鴨IgG稀釋度為1:2000。用32份陰性血清測得臨界值為0.2310。建立的ELISA方法重復性好,板內(nèi)變異系數(shù)1.09%-2.67%,板間變異系數(shù)2.79-4.06%,均小于10%。建立的方法與大腸桿菌、多殺性巴氏桿菌、鴨瘟病毒、鴨肝炎病毒、沙門氏菌陽性血清無交叉反應,特異性好。用制備的鴨腺病毒蜂膠滅活疫苗免疫實驗鴨,以間接ELISA和血凝抑制試驗監(jiān)測免疫鴨抗體消長規(guī)律。ELISA結果顯示：一次免疫組種鴨免疫后第3d就可在血清中檢測到血清呈陽性,第14... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻綜述
    1 鴨腺病毒研究現(xiàn)狀
        1.1 鴨腺病毒在腺病毒中的分類地位
        1.2 鴨腺病毒的形態(tài)結構
        1.3 鴨腺病毒基因組結構和功能
        1.4 鴨腺病毒理化性質
        1.5 鴨腺病毒感染禽類引起的疾病
            1.5.1 雞減蛋綜合征
            1.5.2 鴨腺病毒病
        1.6 檢測鴨腺病毒感染的方法
            1.6.1 病原分離鑒定
            1.6.2 血清學方法
            1.6.3 分子生物學方法
    2 蜂膠及其應用
        2.1 蜂膠
            2.1.1 蜂膠的免疫佐劑作用
            2.1.2 蜂膠佐劑提高體液免疫功能
            2.1.3 蜂膠佐劑提高細胞免疫功能
            2.1.4 蜂膠對免疫器官的作用
            2.1.5 蜂膠的安全性
        2.2 蜂膠佐劑的應用
    3 選題目的
第二章 鴨腺病毒蜂膠滅活苗的研制及其免疫原性研究
    1 試驗材料
        1.1 試驗毒株
        1.2 參考毒(菌)株
        1.3 試驗動物
        1.4 主要試驗試劑及配方
            1.4.1 血凝及血凝抑制試驗試劑
            1.4.2 ELISA試驗試劑
            1.4.3 MTT試驗試劑
        1.5 試驗儀器
        1.6 其他試驗材料
    2 試驗方法
        2.1 研制鴨腺病毒蜂膠滅活疫苗
            2.1.1 制備種毒
            2.1.2 制備蜂膠滅活苗
        2.2 檢測鴨腺病毒抗體的間接ELISA方法的建立
            2.2.1 抗原的制備與純化
            2.2.2 陰性血清制備
            2.2.3 陰性鴨IgG的提取
            2.2.4 酶標二抗最佳稀釋度的確定
            2.2.5 抗原和血清最佳稀釋度的確定
            2.2.6 血清最佳作用時間的確定
            2.2.7 鴨腺病毒陰性血清臨界值的確定
            2.2.8 間接ELISA操作程序
            2.2.9 特異性試驗
            2.2.10 敏感性試驗
            2.2.11 重復性試驗
        2.3 鴨腺病毒蜂膠滅活疫苗免疫種鴨及免疫應答監(jiān)測
            2.3.1 鴨腺病毒蜂膠滅活疫苗免疫種鴨
            2.3.2 鴨腺病毒蜂膠滅活疫苗免疫實驗鴨的抗體監(jiān)測
            2.3.3 鴨腺病毒蜂膠滅活疫苗免疫實驗鴨的細胞免疫監(jiān)測
    3 試驗結果
        3.1 研制鴨腺病毒蜂膠滅活疫苗
            3.1.1 測定半數(shù)感染量(EID_(50))
            3.1.2 種毒檢驗
            3.1.3 蜂膠含量測定
            3.1.4 疫苗性狀、疫苗的無菌檢驗和安全性檢驗
        3.2 檢測鴨腺病毒抗體的間接ELISA方法的建立
            3.2.1 抗原制備與純化
            3.2.2 陰性血清制備
            3.2.3 陰性鴨IgG的提取
            3.2.4 HRP-羊抗鴨IgG最佳稀釋度
            3.2.5 抗原和血清最佳稀釋度
            3.2.6 血清最佳作用時間
            3.2.7 鴨腺病毒陰性血清臨界值
            3.2.8 特異性試驗結果
            3.2.9 敏感性試驗結果
            3.2.10 重復性試驗結果
        3.3 鴨腺病毒蜂膠滅活疫苗免疫種鴨及免疫應答監(jiān)測
            3.3.1 種鴨免疫后血清抗體ELISA效價測定
            3.3.2 種鴨免疫后血清抗體血凝抑制(HI)效價測定
            3.3.3 鴨淋巴細胞轉化試驗結果
            3.3.4 白細胞吞噬試驗
    4 討論
        4.1 疫苗的研制
        4.2 間接ELISA方法的建立
            4.2.1 抗原的純化
            4.2.2 抗原和血清稀釋度
            4.2.3 酶標二抗?jié)舛鹊拇_定
            4.2.4 臨界值的確定
        4.3 疫苗對種鴨體液免疫的影響
            4.3.1 間接ELISA試驗
            4.3.2 血凝試驗和血凝抑制試驗
        4.4 疫苗對種鴨細胞免疫的影響
            4.4.1 疫苗對鴨外周血T淋巴細胞轉化效果的影響(MTT法)
            4.4.2 白細胞吞噬試驗
    5 結論
參考文獻
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表的論文


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3551173