豬圓環(huán)病毒相關疾�。≒CVAD）是由豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）引起的重要傳染病之一,臨床上可以引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）、豬皮炎和腎病綜合征（PDNS）、呼吸道疾病、繁殖障礙和先天震顫等多種疾病,給全球的養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大經(jīng)濟損失。Cap蛋白是PCV2的主要免疫原性蛋白,具有多個表位,是研究PCV2血清學診斷方法和疫苗免疫的重要蛋白。本研究構建了表達PCV2Cap蛋白的重組桿狀病毒和昆蟲細胞系,并進行了免疫特性研究,為PCV2亞單位疫苗的研究奠定了重要基礎。具體研究內(nèi)容如下：1.表達PCV2Cap蛋白的重組桿狀病毒的構建和鑒定本研究以密碼子優(yōu)化的PCV2ORF2基因為基礎,設計了6對引物,通過PCR擴增了多種ORF2片段,分別克隆到昆蟲桿狀病毒表達系統(tǒng)的pFastBac供體質(zhì)粒上,經(jīng)PCR、雙酶切和測序鑒定得到正確的重組供體質(zhì)粒。再用該重組供體質(zhì)粒轉(zhuǎn)化DH10Bac感受態(tài)細菌,經(jīng)兩輪藍白斑篩選和PCR鑒定后,得到了正確的重組Bacmid。在脂質(zhì)體介導下,用重組Bacmid轉(zhuǎn)染Sf9昆蟲細胞,得到了7種重組桿狀病毒,SDS-PAGE、Westernblot、間接免疫熒光、夾心... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：97 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

PCV2和PCVl基因組編碼情況

第一章豬圓環(huán)病毒2型研究進展大的開放閱讀框，PCV2-0RF1含有945個堿基，PCV1-0RF1含有939個的Rep蛋白與病毒的復制相關，兩者的氨基酸序列同源性為86%;而兩者同源性則比較低，其中核苷酸序列同源性為67%，氨基酸序列同源性僅為，在PCV2的復制起點存在著近乎一致的特殊結(jié)構，即與病毒滾環(huán)復制circle replication, RCR)相關的蓮環(huán)結(jié)構[24]，具體結(jié)構見圖 1-3。-XT.

豬圓環(huán)病毒2型0RF2基因在昆蟲細胞中的表達及其免疫特性研究的主要結(jié)構蛋白，由233個氨基酸構成，分子量約為28KDa。Cap蛋白首先由awagitgul等_證實，他用桿狀病毒表達系統(tǒng)得到的Cap蛋白與天然病毒的Cap蛋白小一致；同時純化的Cap蛋白能夠自組裝為病毒樣顆粒（Vims like particle, VLP)。外，LiuQ等人[3i]利用大腸桿菌表達的0RF2來制備特異性多抗，Western blot分析實0RF2編碼PCV的Cap蛋白；通過免疫焚光分析及位點突變分析的研究表明，CV2 Cap蛋白的N端包含一個由41個氨基酸構成的核定位信號序列，其中位于12-18及34-41位的氧基酸殘基對PCV2 Cap蛋白的精確定位起著至關重要的作用。最近，eza Khayat等人[9°]解析出了 PCV2病毒樣粒子的晶體結(jié)構，加深了對Cap蛋白結(jié)的了解，具體結(jié)構見圖1-4。


本文編號：3547974