鹿茸為雄鹿的第二性征,是鹿進入青春期后在額骨頂部長出的包括血管、皮層、軟骨等多個組織形成的器官。梅花鹿鹿茸是哺乳動物中唯一可完全再生的骨質(zhì)器官,有著其它動物不可比擬的生長速度和超強的穩(wěn)定性,是研究器官再生和創(chuàng)傷修復(fù)的理想模型。鹿茸經(jīng)過特殊的骨形成方式完成周期性的再生,這個過程是由多種因素共同作用的結(jié)果。轉(zhuǎn)化生長因子（Transforming growth factor,TGF）廣泛分布于成纖維及上皮細胞內(nèi)。研究表明TGF-β2存在于鹿茸頂端組織中,可與Wnt信號通路協(xié)同促進上皮細胞向間充質(zhì)細胞的轉(zhuǎn)化,并使細胞維持在間充質(zhì)狀態(tài)。而鹿茸頂端軟骨組織形成的最初階段源于間充質(zhì)的快速生長。故TGF-β對鹿茸軟骨快速生長階段的調(diào)控機理需要進一步的研究。本實驗應(yīng)用PCR技術(shù)克隆獲得梅花鹿TGF-β2基因編碼區(qū)全長cDNA序列,將其純化回收并構(gòu)建重組質(zhì)粒pMD-18T-TGF-β2,轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5a中后進行PCR及雙酶切鑒定,最后進行核苷酸序列測定。應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測TGF-β2在梅花鹿鹿茸頂端不同組織的表達。應(yīng)用Trizol試劑法提取鹿茸頂端軟骨及間充質(zhì)細胞總RNA,并進行HiSeq深度測序... 

【文章來源】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)吉林省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

TGF-β信號通路圖

%的血清進行封閉，37℃孵，室溫孵育 20min，PBS 沖育 20 min，PBS 沖洗三次，in，顯微鏡下觀測結(jié)果。滌過后，將切片放于 1%鹽酸90%、95%、無水乙醇中， Olympus 對結(jié)果進行分析。提取法得到梅花鹿鹿茸頂端組織中可以看出，所得到的總 現(xiàn)象。

圖 2-2 TGF-β2 基因 PCR 擴增NA Marker（DL2000）；1.PCR.2-2 PCR amplification of TGF-β2 DNA Marker (DL2000);1. PCR pTGF-β2 的 PCR 鑒定與雙酶切為模板，進行 PCR 反應(yīng)，P現(xiàn)目的條帶。結(jié)果如圖 2-3β2，同樣于 1245bp 處出現(xiàn)目1245bp2000bp1000bp750bp500bp

【參考文獻】：
期刊論文
[1]梅花鹿VEGF基因的克隆及其在鹿茸頂端組織的表達[J]. 韓香玉,吳炎,李璐,閆語多,胡薇.  吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2017(04)
[2]血管化鹿茸軟骨組織與骨組織修復(fù)[J]. 付晶,褚文輝,孫紅梅,李春義,馬麗娟.  中國組織工程研究. 2016(46)
[3]鹿茸組織microRNA的研究進展[J]. 閆語多,韓香玉,吳雷,胡薇.  中國畜牧雜志. 2016(21)
[4]不同生長時期梅花鹿鹿茸差異蛋白質(zhì)組學(xué)分析[J]. 張然然,劉華淼,邵元臣,周盼伊,蘇瑩,王磊,邢秀梅.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報. 2016(03)
[5]西豐鹿茸,世代相傳的“中醫(yī)鉆石”[J]. 彌耳.  品牌與標準化. 2015(10)
[6]豬MiR-148a對肝臟發(fā)育調(diào)控的初步研究[J]. 李艷華,趙俊生,周輝云,徐寧迎.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報. 2015(04)
[7]鹿茸成骨過程及其相關(guān)調(diào)控機制研究進展[J]. 張偉,褚文輝,李春義.  中國農(nóng)學(xué)通報. 2015(08)
[8]microRNA定量檢測方法的研究進展[J]. 祝申蓉,吳旭日,陳依軍.  中國藥科大學(xué)學(xué)報. 2015(01)
[9]《雙祿壺》的造型寓意[J]. 沈艷萍.  山東陶瓷. 2014(06)
[10]微骨折技術(shù)聯(lián)合IGF-1修復(fù)兔關(guān)節(jié)軟骨缺損的實驗研究[J]. 張復(fù)文,劉德寶,王剛,任振華.  中國修復(fù)重建外科雜志. 2014(05)

博士論文
[1]小RNA深度測序在柑橘新發(fā)病毒的鑒定及TuMV誘導(dǎo)的抗病毒新機制中的研究[D]. 于云奇.西南大學(xué) 2017
[2]miR-125a-5p通過靶向調(diào)控VEGF-A影響胃癌血管新生的研究[D]. 戴俊.華中科技大學(xué) 2016
[3]馬鹿（Cervus elaphus）鹿茸快速生長期生長點軟骨和茸皮組織microRNA表達譜研究[D]. 陳艷霞.東北林業(yè)大學(xué) 2016
[4]鹿茸形態(tài)發(fā)生及生物電對其影響的研究[D]. 趙海平.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2015
[5]microRNA的腫瘤表達研究及協(xié)同調(diào)控網(wǎng)絡(luò)分析[D]. 崔洪亮.中南大學(xué) 2014
[6]一個新克隆的microRNA調(diào)節(jié)破骨細胞分化的作用及機制研究[D]. 梁夢柯.中南大學(xué) 2014
[7]骨骼肌發(fā)育中miR-148a功能與qPCR內(nèi)參基因的研究[D]. 張晶.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[8]鹿茸中有效成分的提取與分離關(guān)鍵技術(shù)及其抗氧化活性的研究[D]. 周冉.天津大學(xué) 2009
[9]梅花鹿茸多肽的化學(xué)結(jié)構(gòu)及其抗肝纖維化作用[D]. 段冷昕.吉林大學(xué) 2007

碩士論文
[1]MiRNA-19a和miRNA-19b對梅花鹿鹿茸組織中TGF-βRⅡ調(diào)控作用的研究[D]. 閆語多.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[2]鹿茸樣品采集及使用抗雄激素提高二茬茸茸重技術(shù)的研究[D]. 張偉.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2016
[3]CGI99在鹿茸軟骨組織生成中的作用[D]. 路曉.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2016
[4]聯(lián)合應(yīng)用外源性TGF-β2及IGF-Ⅰ對大鼠骨折愈合的影響[D]. 劉亞軍.蚌埠醫(yī)學(xué)院 2015
[5]TGFβ1誘導(dǎo)胰腺癌細胞株EMT相關(guān)機制的研究[D]. 孟茜茜.第二軍醫(yī)大學(xué) 2015
[6]加味芍藥甘草湯聯(lián)合膝三針治療老年膝骨關(guān)節(jié)炎臨床研究[D]. 羅力.廣州中醫(yī)藥大學(xué) 2015
[7]梅花鹿VEGF基因的克隆、原核表達及對細胞增殖的影響[D]. 吳炎.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[8]馴鹿茸頂端間充質(zhì)組織雌雄差異表達基因的初步篩選[D]. 高力.東北林業(yè)大學(xué) 2015
[9]MicroRNA介導(dǎo)的IGF-1R基因沉默對鹿茸軟骨細胞增殖抑制的影響[D]. 李婷.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[10]鹿茸分裂層細胞的分離培養(yǎng)及褪黑激素對間充質(zhì)細胞的影響[D]. 王春雷.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013



本文編號：3546976