本研究應(yīng)用PureSperm離心法和上游法進行流式細胞儀分離牛原精去除死精子方法研究,目的是通過去除原精中的死精子進一步提高牛精子分離-性控凍精生產(chǎn)效率。實驗結(jié)果：①PureSperm離心法處理原精后死精率降低（原精：處理組=24.96%vs13.45%）,但解凍后活力（原精：處理組=0.38vs0.31）和存活時間（原精處理組=4.34h vs3.59h）下降。②上游法精子浮游活力呈垂直分布,底部至頂部精子活力逐步提高、精子數(shù)量逐步下降。上游法處理原精后死精率（原精：處理組=14.11%vs5.81%）顯著下降（P<0.05）,解凍后活力（原精：處理組=0.47vs0.47）及解凍后存活時間（原精：處理組=6.Oh vs6.17h）均無顯著差異（P>0.05）。③上游法處理的精液,與原精相比分離效率提升16.19%,但PureSperm法處理后精液分離效率與原精相比沒有明顯效果。④上游法處理后與原精相比頂體完整性（原精：處理組=0.61vs0.61）、線粒體活性（原精：處理組=0.43vs0.47）、膜完整性（原精：處理組=0.22vs0.26）均無顯著差異（P>0... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古大學內(nèi)蒙古自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：42 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻綜述
    1.1 流式細胞儀精子分離簡介
        1.1.1 流式細胞儀結(jié)構(gòu)簡介圖
        1.1.2 流式細胞儀分離精子的原理
    1.2 流式細胞儀精子分離法存在問題和應(yīng)用前景
    1.3 去除死精子技術(shù)研究進展
    1.4 研究目的與意義
第二章 PureSperm離心法去死精子及精子分離-性控凍精生產(chǎn)技術(shù)研究
    2.1 實驗材料
        2.1.1 主要儀器設(shè)備
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 基礎(chǔ)液的配制
        2.1.4 采精、運輸和原精保存
    2.2 PureSperm法處理精液
    2.3 精子的染色、分離和冷凍保存
    2.4 解凍后分離精子的評估
        2.4.1 解凍后精子的活力檢測
        2.4.2 解凍后精子的存活時間測定
    2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
第三章 上游法去死精子及精子分離-性控凍精生產(chǎn)技術(shù)研究
    3.1 實驗材料
        3.1.1 主要儀器設(shè)備
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 基礎(chǔ)液的配制
        3.1.4 采精、運輸和原精保存
    3.2 上游法處理精液
    3.3 精子的染色結(jié)合精子上游法處理
    3.4 精子分離和冷凍保存
    3.5 解凍后分離精子的評估
        3.5.1 解凍后精子的活力檢測
        3.5.2 解凍后精子的存活時間測定
        3.5.3 解凍后分離精子的質(zhì)膜完整性檢測
        3.5.4 解凍后分離精子的頂體完整性檢測
        3.5.5 解凍后分離精子的線粒體活性檢測
    3.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
第四章 結(jié)果及討論
    4.1 PureSperm法去死精子及精子分離-性控凍精生產(chǎn)技術(shù)研究
        4.1.1 實驗結(jié)果
        4.1.2 討論
    4.2 上游法去死精子及精子分離-性控凍精生產(chǎn)技術(shù)研究
        4.2.1 實驗結(jié)果
            4.2.1.1 使用10ml注射器上游法處理
            4.2.1.2 使用60ml注射器上游法處理
            4.2.1.3 精子染色后使用60ml注射器上游法處理
            4.2.1.4 上游法處理后分離精子解凍后質(zhì)膜完整性、線粒體活性和頂體完整性檢測
        4.2.2 討論
第五章 結(jié)論
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]馬鹿X/Y精子分離及人工授精技術(shù)研究[J]. 胡樹香,王建國,劉樹江,張立民,周文忠,孫偉,錢松晉,李煜,李喜和.  中國草食動物. 2009(05)
[2]應(yīng)用X精子冷凍精液生產(chǎn)體內(nèi)性控胚胎的試驗研究進展[J]. 黃河,李鑫,扈長春,胡莉萍,羅應(yīng)榮.  中國畜牧獸醫(yī). 2005(07)



本文編號：3523391