發(fā)布時間：2021-11-27 09:56

　　小反芻獸疫病毒（PPRV）屬于副黏病毒科麻疹病毒屬,主要感染山羊和綿羊等小反芻動物,具有較高的發(fā)病率和死亡率,世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為法定報告的疾病,我國列為I類動物傳染病。近年來小反芻獸疫在我國頻頻發(fā)生,對畜牧業(yè)的發(fā)展造成嚴(yán)重威脅,該病主要以免疫預(yù)防為主,因此準(zhǔn)確檢測免疫抗體對于防控該病非常重要。以篩選的PPRV H蛋白B細(xì)胞表位為基礎(chǔ),選擇反應(yīng)原性較好的4段抗原表位串聯(lián)后合成作為包被抗原,建立針對H蛋白抗體的iELISA檢測方法,并對相關(guān)條件進(jìn)行優(yōu)化。經(jīng)優(yōu)化后,多表位抗原肽的最佳包被濃度為1.5ⅹ10^-6μg/孔,待檢血清陰陽性臨界稀釋濃度為1:100,酶標(biāo)二抗最佳稀釋濃度為1:80000;對反應(yīng)中各種緩沖液進(jìn)行篩選:包被液為碳酸鹽緩沖液;血清和二抗稀釋液均為PBST溶液,封閉液為2%BSA溶液;本試驗在陽性對照OD₄₅₀≥0.5、陰性對照OD₄₅₀<0.25的基礎(chǔ)上,血清樣品的判定標(biāo)準(zhǔn)為:OD₄₅₀<?X+2S=0.25為陰性,OD₄₅₀≥?X+3S... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

小反芻獸疫病毒基因組結(jié)構(gòu)

中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文第一章引言3圖1-2小反芻獸疫病毒粒子結(jié)構(gòu)Fig1-2ThestructureofPPRVparticle1.1.2病毒基因編碼的蛋白及其功能1.1.2.1核衣殼（N）蛋白PPRV核衣殼蛋白是病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞后最先表達(dá)的蛋白，也是病毒最為主要的結(jié)構(gòu)蛋白，其基因全長1577bp，編碼525個氨基酸，蛋白分子量大約為58kDa。小反芻獸疫病毒N蛋白高度保守，其序列與麻疹病毒屬其它成員具有較高的相似性，同源性在75-83%之間，根據(jù)這一點將N蛋白分為4個區(qū)段。區(qū)段I位于1-120氨基酸區(qū)段且高度保守；區(qū)段II位于122-145氨基酸區(qū)段，同源性僅40%；區(qū)段III位于146-398氨基酸處，為保守性最高的區(qū)段；區(qū)段IV位于421-525氨基酸處，為保守性最差的區(qū)段(Baileyetal.,2005;A.Diallo,Barrett,Barbron,Meyer,&Lefevre,1994)。相關(guān)研究顯示，PPRVN蛋白I區(qū)和II區(qū)相對于III區(qū)和IV區(qū)具有相對較好的免疫原性，這與麻疹病毒成員中麻疹病毒和牛瘟病毒N蛋白相應(yīng)區(qū)域的免疫原性一樣(Choi,Nah,Ko,Kang,&Joo,2003;N,O,&L,1989)。N蛋白在病毒的生命周期中扮演著重要的作用。在病毒組裝階段，N蛋白可與病毒M蛋白相互作用從而促進(jìn)病毒的組裝；同時也是病毒基因組RNA形成核衣殼必不可少的成分，在病毒的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄過程中參與到P-L聚合酶的形成。通過對病毒N基因進(jìn)行沉默，可檢測到病毒的復(fù)制減少，進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)對N蛋白進(jìn)行抑制后PPRVM蛋白的表達(dá)量減少(ServandeAlmeida,Keita,Libeau,&Albina,2007)，說明病毒N蛋白與病毒的復(fù)制密切相關(guān)。N蛋白雖然是病毒免疫原性最強(qiáng)且表達(dá)量最豐富的蛋白，但該蛋白并不能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫保護(hù)。由于N蛋白免疫原性最強(qiáng)，所以被廣泛應(yīng)用于PPRV診斷技術(shù)的開發(fā)。1.1.2.2磷酸化（P）蛋白

中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文第一章引言7圖1-3基于H基因的PPRV進(jìn)化分析(Liangetal.,2016)Fig1-3ThephylogenticanalysisofPPRVbasedonHgene(Z.Liang,Yuan,Chen,Zhu,&Dou,2016)1.1.4PPRV的致病機(jī)制1.1.4.1PPRV誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡病毒進(jìn)入細(xì)胞后具有阻止細(xì)胞凋亡的機(jī)制，也有促進(jìn)細(xì)胞凋亡的機(jī)制。PPRV的感染周期較長，可達(dá)4-7天，病毒進(jìn)入細(xì)胞后利用其抑制細(xì)胞凋亡的機(jī)制阻止細(xì)胞凋亡，從而延長病毒在胞內(nèi)的持續(xù)增殖；當(dāng)病毒粒子將要從胞內(nèi)釋放，病毒即啟動促進(jìn)細(xì)胞凋亡的機(jī)制，促進(jìn)細(xì)胞凋亡裂解使病毒釋放持續(xù)感染臨近的細(xì)胞。誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的同時產(chǎn)生細(xì)胞毒性，由此產(chǎn)生致病性。PPRV感染山羊的外周血單淋巴細(xì)胞后，誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡可以促進(jìn)病毒在細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制(Mondal,Sreenivasa,Dhar,Singh,&Bandyopadhyay,2001)。研究發(fā)現(xiàn)麻疹病毒的N蛋白為誘導(dǎo)凋亡的關(guān)鍵蛋白(Ashima,Jyoti,Akhil,Pramod,&J.,2011)，N蛋白在麻疹病毒屬成員中相對保守且PPRVN蛋白與MV的N蛋白具有高度相似性，因此可以推測PPRV的N蛋白也可能具有MVN蛋白的相似功能。相關(guān)研究表明，PPRV感染后誘導(dǎo)的凋亡與PPRV和免疫系統(tǒng)之間的相互作用有關(guān)，雖然其機(jī)制尚不清楚，但這一現(xiàn)象已在MV上得到驗證(Schnorr,Seufert,Schlender,Borst,&Schneider-Schaulies,1998)。1.1.4.2PPRV引起的免疫抑制

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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本文編號：3522045