濟寧青山羊是我國一個優(yōu)秀地方品種，具有性成熟早和繁殖率高的特點。從激素和受體表達水平等角度研究青山羊性發(fā)育過程，對于闡明濟寧青山羊性成熟早的機理和培育新的高繁殖力山羊品種或品系等具有重要意義。本研究以雌性濟寧青山羊為研究對象，應用放射免疫、組織化學、免疫組織化學、透射電鏡、實時熒光定量PCR和WesternBlot等方法，從激素水平、細胞水平、亞細胞水平和分子水平等層面系統研究從出生到性成熟山羊血液中雌孕激素的波動、雌孕激素受體在下丘腦-垂體-卵巢軸以及雌孕激素受體在生殖器官發(fā)育過程中的增齡性分布特點及變化規(guī)律。研究結果顯示，在雌性濟寧青山羊生后發(fā)育階段：①下丘腦與生殖有關的核團均有ER和PR陽性細胞分布，各核團ERα、ERβ和PR陽性細胞隨日齡增長而數量增多，且同一日齡同一核團內ERβ陽性著色明顯強于ERα（p<0.05）。PR免疫反應陽性神經元的分布和變化規(guī)律與ERβ基本一致。ERα、ERβ和PR陽性細胞在下丘腦中分布的增齡性變化與濟寧青山羊性發(fā)育和性早熟的特點密切相關；②腺垂體嗜色細胞隨著年齡增長而數量增多，體積增大；ERα主要分布于嗜色細胞的細胞核，ERβ和PR主要分布于... 

【文章來源】：山東農業(yè)大學山東省

【文章頁數】：106 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
符號說明
中文摘要
Abstract
前言
    1.1 下丘腦-垂體-卵巢軸
    1.2 雌、孕激素及其受體的結構和功能
    1.3 性發(fā)育過程中外周血中雌、孕激素含量的變化
    1.4 雌、孕激素及其受體在下丘腦的研究
    1.5 雌、孕激素及其受體在腺垂體的研究
    1.6 雌、孕激素及其受體在卵巢的研究進展
    1.7 雌、孕激素及其受體在子宮的研究
    1.8 雌、孕激素及其受體在輸卵管的研究
    1.9 濟寧青山羊
    1.10 目的意義
    1.11 技術路線
材料與方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 試驗動物
        2.1.2 取材方法
        2.1.3 試驗地點
        2.1.4 主要儀器設備及產地
        2.1.5 主要試驗試劑及來源
        2.1.6 主要生物學數據庫和生物學軟件
    2.2 血清激素水平的測定
    2.3 細胞化學檢測
        2.3.1 切片標本制備
        2.3.2 HE 染色
        2.3.3 PAS( Periodic acid - Schiff )染色
        2.3.4 甲苯胺藍( Toluidine blue )染色
        2.3.5 瑞氏（Wright's staim）染色
        2.3.6 免疫組織化學 SABC 染色及圖像分析
    2.4 透射電鏡觀察
    2.5 實時定量 RT-PCR
        2.5.1 總 RNA 的提取及質量鑒定
        2.5.2 引物設計及優(yōu)化
        2.5.3 模板 DNA 的合成與 qRT-PCR
        2.5.4 qRT-PCR 標準曲線的制作及熒光定量數據分析
    2.6 免疫印跡與分析
        2.6.1 蛋白樣品制備與蛋白含量檢測
        2.6.2 SDS-PAGE 電泳
        2.6.3 轉膜與免疫反應
        2.6.4 凝膠圖象分析
    2.7 數據處理
結果
    3.1 濟寧青山羊后發(fā)育階段下丘腦中 ERα、ERβ和 PR 陽性細胞的增齡性變化
        3.1.1 血清中激素含量的測定結果
        3.1.2 下丘腦核團 HE 染色結果
        3.1.3 濟寧青山羊下丘腦各核團 ERα和 ERβ免疫陽性細胞的發(fā)育性變化
        3.1.4 濟寧青山羊下丘腦各核團 PR 免疫陽性細胞的發(fā)育性變化
    3.2 濟寧青山羊生后發(fā)育階段腺垂體細胞的增齡性變化以及雌、孕激素受體的分布與表達特點
        3.2.1 雌性濟寧青山羊生后腺垂體的發(fā)育性變化
        3.2.2 雌性濟寧青山羊腺垂體 ERα、ERβ和 PR 免疫陽性細胞的發(fā)育性變化
        3.2.3 青山羊腺垂體 Western blotting 結果及分析
    3.3 濟寧青山羊生后卵巢發(fā)育特性與雌、孕激素受體的分布其 mRNA 的表達
        3.3.1 不同日齡卵巢的組織學觀察
        3.3.2 總 RNA 及 qRT-PCR 產物的鑒定
        3.3.3 qRT-PCR 產物熔解曲線分析
        3.3.4 標準曲線及其目的基因的擴增效率
        3.3.5 卵巢內 ERα和 ERβ免疫陽性產物及其 mRNA 表達的發(fā)育性變化
        3.3.6 卵巢內 PR 免疫陽性產物及其 mRNA 表達的發(fā)育性變化
    3.4 濟寧青山羊生后發(fā)育階段子宮內 ERα、ERβ和 PR 的分布及其 mRNA 的表達
        3.4.1 ERα免疫陽性細胞在生后發(fā)育時期子宮內的分布及 mRNA 表達
        3.4.2 ERβ免疫陽性細胞在生后發(fā)育時期子宮內的分布及 mRNA 表達
        3.4.3 PR 免疫陽性細胞在生后發(fā)育時期子宮內的分布及 mRNA 表達
    3.5 濟寧青山羊生后發(fā)育階段輸卵管壺腹部與傘部粘膜上皮的試驗觀察
        3.5.1 不同月齡輸卵管粘膜上皮細胞的組織化學染色結果
        3.5.2 輸卵管粘膜上皮“腔排”現象電鏡觀察結果
        3.5.3 輸卵管粘膜上皮細胞免疫組化染色結果
討論
    4.1 濟寧青山羊后發(fā)育階段血清中 E2 和 P 的分泌變化與下丘腦中 ERα、ERβ和 PR陽性細胞的分布特點
    4.2 雌性濟寧青山羊生后發(fā)育階段腺垂體細胞的增齡性變化以及與雌、孕激素受體的關系
    4.3 濟寧青山羊生后卵巢發(fā)育特性以及與雌、孕激素受體的關系研究
        4.3.1 濟寧青山羊卵巢的生后發(fā)育特點
        4.3.2 雌孕激素受體在青山羊生后發(fā)育卵巢中的分布
        4.3.3 雌、孕激素受體及其 mRNA 的表達水平與青山羊生后卵巢發(fā)育的關系
    4.4 濟寧青山羊子宮內 ERα、ERβ和 PR 的分布及其 mRNA 表達的增齡性變化
        4.4.1 生后發(fā)育時期 ERα、ERβ免疫陽性細胞在子宮中的分布特點及其 mRNA 表達
        4.4.2 生后發(fā)育時期 PR 免疫陽性細胞在子宮中的分布特點及其 mRNA 表達
        4.4.3 ERα、ERβ和 PR 在子宮發(fā)育過程中的作用
    4.5 濟寧青山羊生后輸卵管壺腹部與傘部粘膜上皮的發(fā)育性變化
        4.5.1 濟寧青山羊輸卵管壺腹部與傘部上皮的生后發(fā)育特點
        4.5.2 生殖激素受體在生后發(fā)育階段輸卵管壺腹部與傘部上皮中的表達
結論
參考文獻
致謝
攻讀學位期間發(fā)表論文


【參考文獻】：
期刊論文
[1]濟寧青山羊生后發(fā)育階段GnRH與GnRHR陽性細胞在下丘腦分布規(guī)律的研究[J]. 劉宵,王樹迎,尹玉濤,張德敏,黃麗波,侯衍猛.  畜牧獸醫(yī)學報. 2012(08)
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碩士論文
[1]青山羊生后發(fā)育過程中GTH分泌與輸卵管中GTH受體表達規(guī)律的研究[D]. 李泰云.山東農業(yè)大學 2011
[2]雌激素受體亞型在子宮內膜異位癥在位內膜及小白鼠模型中的表達及意義[D]. 張翼海.中國醫(yī)科大學 2009
[3]萊蕪黑山羊松果體與下丘腦的組織學與免疫組織化學的研究[D]. 王凌燕.山東農業(yè)大學 2006



本文編號：3514519