發(fā)布時間：2021-11-22 16:03

　　本研究通過培養(yǎng)奶牛乳腺上皮細胞,并以該細胞為研究對象,研究中藥復方透皮貼劑和中藥復方灌注液對奶牛乳腺上皮細胞增殖、總蛋白含量以及β-酪蛋白含量的影響。從奶牛乳房無菌采取乳腺組織,通過體外原代培養(yǎng)、分離純化以及傳代等方法建立穩(wěn)定的奶牛乳腺上皮細胞系。倒置顯微鏡下對奶牛乳腺上皮細胞進行觀察,做形態(tài)學鑒定；繪制細胞生長曲線；通過SDS-PAGE電泳鑒定奶牛乳腺上皮細胞所分泌的p-酪蛋白。制備中藥復方透皮貼劑及其主要成分的單味中藥提取物和中藥復方灌注液及其主要成分的單味中藥提取物,添加到奶牛乳腺上皮細胞培養(yǎng)液中,研究其對奶牛乳腺上皮細胞增殖、總蛋白以及p-酪蛋白含量的影響。試驗結果如下：本試驗中,通過組織塊培養(yǎng)法可獲得奶牛乳腺細胞,通過胰蛋白酶多次消化的方法可基本去除奶牛乳腺細胞中的成纖維細胞,獲得較為純化的奶牛乳腺上皮細胞；經過傳代以后,奶牛乳腺上皮細胞的形態(tài)以及生理功能不發(fā)生改變,從而建立了穩(wěn)定的奶牛乳腺上皮細胞系。采用不同濃度的中藥復方灌注液及其單味中藥的提取液處理奶牛乳腺上皮細胞1d后,在濃度為10 mg·mL-1時OD值最大,但促進細胞增殖的效果不顯著（P>0.05）。采用10... 

【文章來源】：安徽農業(yè)大學安徽省

【文章頁數】：52 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１奶牛乳腺上皮細胞形態(tài)學觀察??

圖２－１奶牛乳腺上皮細胞形態(tài)學觀察??Ｆｉｇ．２－１?ｄａｉｒｙ?ｃｏｗ?ｍａｍｍａｒｙ?ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ?ｃｅｌｌ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ??Ａ－Ｄ．培養(yǎng)口ｄ的原代細胞ＯＯＯＯ：?Ｅ－任原代細胞經過膜蛋白酶純化后，上皮細胞與成纖維細胞分界（ｌＯＯｘ）?Ｈ．第３代，鋪路??石狀乳腺上皮細胞（２０００；?Ｉ．第３代，鋪路石狀乳腺上皮細施（ｌＯＯｘ）；?Ｊ－Ｋ．第３代，分泌乳滴的乳腺上皮細胞ＵＯＯｘ）；??Ａ－Ｂ．?Ｐｒｉｍａｒｙ?ｍａｍｍａｒｙ?ｅｐｉ化ｅｌｉａ］?ｃｅｌｌｓ?ａｆｔｅｒ?ｃｕｌｔｕｃｄ?ｆｏｒ?１２?ｄａｙｓ（?１００?巳－Ｇ．?Ｔｈｅ?ｃｌｅａｒ?ｂｏｕｎｄａｒｉｅｓ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ｅｐｉ化ｄｉａｌ?ｃｅｌｉｓ?ａｎｄ??巧ｂｒｏｂｌａｓｔｓ?ａｆｔｅｒ?ｐｕｒｉｆｉｅｄ?ｂｙ?ｔｒｙｐｓｉｎ（ｌＯＯｘ）；?Ｈ．?Ｃｏｂｂｌｅｓｔｏｎｅ?ｍａｍｍａｒｙ?ｅｐｉ化ｅｌｉａｌ?ｃｅｌｌｓ，?３ｒｄ?ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ（２０〇ｘ）；?Ｉ．?Ｃｏｂｂｌｅｓ化ｎｅ?ｍａｍｍａｒｙ??ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ?ｃｅｌｌｓ，?３ｒｄ?ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ（?１００?Ｘ）；?Ｊ－Ｋ．?Ｍａｍｍａｒｙ?ｅｐｋｈｄｉａｌ?ｃｅｌｌｓ?ｆｏｒ?ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ?ｍｉｌｋ?（１０〇ｘ）；??２．２奶牛乳腺上皮細胞生物學性狀的檢測??２．２．１奶牛乳腺上皮細胞生長曲線??由圖２可見，Ｗ培養(yǎng)時間為橫坐標，３孔細胞４９２?ｎｍ處吸光值的平均值為??縱坐標，繪制奶牛韓腺上皮細胞生長曲線。細胞生長曲線顯示：乳腺上皮細胞生??長延遲期為０－２?ｄ

圖２－１奶牛乳腺上皮細胞形態(tài)學觀察??Ｆｉｇ．２－１?ｄａｉｒｙ?ｃｏｗ?ｍａｍｍａｒｙ?ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ?ｃｅｌｌ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ??Ａ－Ｄ．培養(yǎng)口ｄ的原代細胞ＯＯＯＯ：?Ｅ－任原代細胞經過膜蛋白酶純化后，上皮細胞與成纖維細胞分界（ｌＯＯｘ）?Ｈ．第３代，鋪路??石狀乳腺上皮細胞（２０００；?Ｉ．第３代，鋪路石狀乳腺上皮細施（ｌＯＯｘ）；?Ｊ－Ｋ．第３代，分泌乳滴的乳腺上皮細胞ＵＯＯｘ）；??Ａ－Ｂ．?Ｐｒｉｍａｒｙ?ｍａｍｍａｒｙ?ｅｐｉ化ｅｌｉａ］?ｃｅｌｌｓ?ａｆｔｅｒ?ｃｕｌｔｕｃｄ?ｆｏｒ?１２?ｄａｙｓ（?１００?巳－Ｇ．?Ｔｈｅ?ｃｌｅａｒ?ｂｏｕｎｄａｒｉｅｓ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ｅｐｉ化ｄｉａｌ?ｃｅｌｉｓ?ａｎｄ??巧ｂｒｏｂｌａｓｔｓ?ａｆｔｅｒ?ｐｕｒｉｆｉｅｄ?ｂｙ?ｔｒｙｐｓｉｎ（ｌＯＯｘ）；?Ｈ．?Ｃｏｂｂｌｅｓｔｏｎｅ?ｍａｍｍａｒｙ?ｅｐｉ化ｅｌｉａｌ?ｃｅｌｌｓ，?３ｒｄ?ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ（２０〇ｘ）；?Ｉ．?Ｃｏｂｂｌｅｓ化ｎｅ?ｍａｍｍａｒｙ??ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ?ｃｅｌｌｓ，?３ｒｄ?ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ（?１００?Ｘ）；?Ｊ－Ｋ．?Ｍａｍｍａｒｙ?ｅｐｋｈｄｉａｌ?ｃｅｌｌｓ?ｆｏｒ?ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ?ｍｉｌｋ?（１０〇ｘ）；??２．２奶牛乳腺上皮細胞生物學性狀的檢測??２．２．１奶牛乳腺上皮細胞生長曲線??由圖２可見，Ｗ培養(yǎng)時間為橫坐標，３孔細胞４９２?ｎｍ處吸光值的平均值為??縱坐標，繪制奶牛韓腺上皮細胞生長曲線。細胞生長曲線顯示：乳腺上皮細胞生??長延遲期為０－２?ｄ

【參考文獻】：
期刊論文
[1]重樓復方對人肝癌SMMC-7721細胞增殖、凋亡及Survivin表達的影響[J]. 胡文靜,劉寶瑞,錢曉萍,涂云霞,王婷婷,禹立霞.  中華中醫(yī)藥雜志. 2013(02)
[2]訶子化學成分與藥理活性研究進展[J]. 劉芳,秦紅飛,劉松青.  中國藥房. 2012(07)
[3]中藥復方透皮貼劑對奶牛臨床型乳房炎的療效及其機理[J]. 馮士彬,李志明,孟慶娟,王希春,韓春楊,鄒松陽,劉琦山,吳金節(jié).  江蘇農業(yè)學報. 2011(04)
[4]中草藥及其復方提取物對奶牛乳房炎致病菌的體外抑菌效果[J]. 孟慶娟,馮士彬,李志明,王希春,韓春楊,鄒松陽,劉琦山,吳金節(jié).  江蘇農業(yè)科學. 2011(04)
[5]中草藥提取物對小鼠乳腺上皮細胞增殖的影響[J]. 王希春,周凡,馮士彬,孟慶娟,李玉,劉芳芳,吳金節(jié).  西北農林科技大學學報(自然科學版). 2011(07)
[6]中藥王不留行對奶牛乳腺細胞增殖及泌乳的影響[J]. 李楠,高學軍,關力.  中國畜牧獸醫(yī). 2011(06)
[7]中藥重樓研究進展[J]. 趙保勝,朱寅荻,馬勇,桂海水,徐暾海.  中國實驗方劑學雜志. 2011(11)
[8]中藥復方灌注劑治療奶牛乳房炎的藥效與應用安全性研究[J]. 孟慶娟,馮士彬,李志明,王希春,韓春楊,鄒松陽,劉琦山,吳金節(jié).  湖北農業(yè)科學. 2011(09)
[9]規(guī)�；膛ｐB(yǎng)殖區(qū)奶牛乳房炎的調查及病因分析[J]. 王玲,李宏勝,王正兵,嚴作庭,苗小樓,陳炅然,祁光紅,肖俊武,張繼良.  中國乳業(yè). 2010(10)
[10]馬蘭提取物抗氧化性研究[J]. 呂麗爽,謝天飛,樊玉潔.  食品科學. 2010(13)

博士論文
[1]王不留行、黃芪對奶牛乳腺上皮細胞體外增殖與分泌功能影響的研究[D]. 丁月云.南京農業(yè)大學 2008

碩士論文
[1]奶牛乳腺上皮細胞體外培養(yǎng)體系的建立及其應用[D]. 崔立莉.新疆農業(yè)大學 2006



本文編號：3512026