疾病已成為現(xiàn)代養(yǎng)豬業(yè)的最大威脅,特別是一些人畜共患病的流行也嚴(yán)重影響著人類的健康。開展抗病育種特別是對抗病候選基因的挖掘是擺在育種工作者面前的最為急迫的任務(wù)。在本實驗室前期工作中,將豬Cav1基因作為一般抗病力的候選基因,對該基因的結(jié)構(gòu)進行了解析,并研究了該基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制,同時分析了該基因在副豬嗜血桿菌（Haemophilus parasuis）感染豬的過程中的表達變化規(guī)律,探究了該基因在Glasser’s病的發(fā)病過程中的作用機制。本研究在前期研究的基礎(chǔ)上對豬Cav1基因的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控做進一步的探索,并選擇乙腦病毒作為感染材料,探究了調(diào)控豬Cav1基因的niRNA在乙腦病毒感染PK15細(xì)胞中的作用機制,主要取得了以下結(jié)果：1.用Targetscan在線軟件預(yù)測了靶向豬Cav1基因的miRNA,并選擇具有保守靶向位點的rniRNA進行生物學(xué)驗證。雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灲Y(jié)果表明,miR-124、miR-199a-5p和：miR-199b-5p可以顯著降低海腎熒光素酶活性；通過Q-PCR的方法檢測到在轉(zhuǎn)染miR-124和niR-199a-5p的細(xì)胞中的Cav1基因的mRNA表達顯著降低,同... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：103 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

Caveolse結(jié)構(gòu)示意圖CPartOnandSimans,2007)

.3.3 microRNA的基本功能miRNA的沉默復(fù)合物由多種蛋白組成，其中研究的較為清楚的是ArgonauteGO)蛋白家族。哺乳動物的AGO家族包括四種蛋白：AG01-AG04。它們的作與miRNA發(fā)揮功能直接相關(guān)，當(dāng)miRNA序列和mRNA的3’UTR相結(jié)合時，都可以制革in蛋白的合成(Liu et al., 2004; Meister et al., 2004; Pillai et al., 2004)。其中AG02以降解mRNA，所以在RNAi中發(fā)揮重要作用。而其他的AGO卻不能降解mRNA，能抑制翻譯。在植物中，miRNA通常和祀基因的mRNA完全配對，以RNAi機制的方式降解內(nèi)mRNA(Jones-Rhoades et al., 2006)。miRNA的這種作用機制在脊椎動物和病毒中極出現(xiàn)(Du and Zamore, 2005)。在動物當(dāng)中，通過實驗和生物信息學(xué)預(yù)測發(fā)現(xiàn)，miRNA基因mRNA通常是不完全配對的，miRNA的2-8nt這段序列和mRNA完全配對，作miRNA的“種子序列（seed region) ”。大多數(shù)的miRNA的結(jié)合位點都在勒i基

確定祀向豬CavJ基因的候選miRNA。最后選擇了其中的5個miRNA進行下一步驗證(圖3-1，表3-1)。表3-1預(yù)測到的miRNA得分情況Table 3-1 Scores of predicted miRNAmiRNA ScoremiR-203 80miR-124 67miR-375 81miR-199a/b-5p 72：!< OU oik 0 5k oik 6.§k O.&k 0)k 0 S< 6 6 k iV iik 15 k itk l4k 1? i.6k l.SkGeneConserved sitts for miRNA families broadly conserved among vertebratesm R-203rr'R-375 rr. R-124/124ao/506 miR-199ab-5pI I ? I圖3-1預(yù)測到的祀向豬CflW基因的miRNAFigure 3-1 miRNA that were predicted to target porcine Cavl gene3.1.2雙勞光素酶報告基因結(jié)果(1)根據(jù)豬CflW基因的3’UTR序列設(shè)計引物，將豬CflW基因的3’UTR全長擴增出來，將其插入到psi-CHECK2載體的海腎焚光素酶基因的3’UTR中，得到重組載體Cav73'UTR-psi-CHECK2,然后將Cflv/3’UTR-psi-CHECK2載體和miRNA mimics共轉(zhuǎn)染BHK-21細(xì)胞，同時設(shè)置陰性對照（NC) , 24h后測定雙焚光素酶活性。結(jié)果顯37

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3509419