本研究從BHK-21細胞培養(yǎng)的狂犬病病毒SRV9株病毒液中提取病毒總RNA，通過反轉(zhuǎn)錄PCR（Reverse transcript PCR，RT-PCR）技術(shù)進行狂犬病病毒結(jié)構(gòu)基因的擴增，得到1352bp的N基因（核蛋白基因，nucleoprotein gene，N），893bp的P基因（磷酸化蛋白基因，phosphoprotein gene，P），608bp的M基因（基質(zhì)基因，matrix protein gene，M），1574bp的G基因（糖蛋白基因，glycoprotein gene，G），3372bp的L1基因（大轉(zhuǎn)錄蛋白1，large protein gene1，L1）以及3012bp L2基因（大轉(zhuǎn)錄蛋白2，large protein gene2，L2），并將其分別連接于pMD19-T載體，進行測序并與SAD B19株比對，實驗結(jié)果如下：N基因、P基因、M基因、G基因、L1基因以及L2基因的核苷酸序列與SAD B19株的核苷酸同源性分別為100%、99.66%、99.67%、99.04%、100%及98.70%，氨基酸序列的同源性分別為100%、98.99%、100%、9... 

【文章來源】：新疆農(nóng)業(yè)大學新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

RV形態(tài)和結(jié)構(gòu)(引自Jackson，2003)

圖1.2 RV基因組結(jié)構(gòu)圖Fig.1.2 Genome structure of rabies virusN蛋白即核蛋白(nucleoprotein)，其編碼基因高度保守，不同的狂犬病病毒株間的同源性高達98%~99.6%。N蛋白有3個主要抗原位點且具有高度一致性。N蛋白在病毒復制過程中與核酸緊密結(jié)合，形成核糖核蛋白，可以保護核酸不被核酸酶降解。有研究表明，N蛋白可作為病毒轉(zhuǎn)錄和復制的模板，還可維持核衣殼轉(zhuǎn)錄所需的螺旋對稱結(jié)構(gòu)[10]，因此，N蛋白是轉(zhuǎn)錄和復制過程中的關(guān)鍵性因子。P蛋白即磷酸化蛋白(phosphoprotein)，具有廣泛的疏水區(qū)�？袢〔《静煌局曛g磷酸化蛋白基因的同源性在92%~98%之間。P蛋白可與L蛋白形成具有轉(zhuǎn)錄酶活性的復合物[11]，約950個P蛋白分子、150個L蛋白分子與N蛋白組成具有轉(zhuǎn)錄和復制活性的核衣殼，該結(jié)構(gòu)可獨立完成RNA的轉(zhuǎn)錄和復制過程[12]。M蛋白即基質(zhì)蛋白(matrix protein)，連接核衣殼和病毒膜。該蛋白1~72位氨基酸間存在一個抗原決定簇，可誘導病毒的免疫反應；第89~107位氨基酸具有疏水性，起錨定作

圖1.3 CDV形態(tài)及結(jié)構(gòu)Fig.1.3 Shape and construction of canine distemper virus組由一條單股負鏈 RNA 組成，全長約 15kb~16kb，從磷酸化蛋白 P、基質(zhì)蛋白 M、融合蛋白 F、吸附蛋白3’端和 5’端存在著由 50 個非編碼核苷酸組成的引導序制和轉(zhuǎn)錄調(diào)控[43-44](見圖 1.4)。圖1.4 CDV基因組結(jié)構(gòu)圖Fig.1.4 Genome structure of canine distemper virus衣殼蛋白(nucleoprotein)，由 523 個氨基酸組成，包錄和復制時充當模板。N 蛋白具有一個完整的開放性轉(zhuǎn)錄、復制、裝配中起重要作用[45]，是 CDV 中相當

【參考文獻】：
期刊論文
[1]狂犬病的流行病學研究進展[J]. 陳曉旭,安榮,夏研.  臨床軍醫(yī)雜志. 2012(06)
[2]41例狂犬病臨床分析[J]. 寇國先,韓愛華,陳明茗,熊鳳鳴,羅大勇.  中國醫(yī)藥導報. 2012(32)
[3]犬瘟熱病毒N蛋白基因融合蛋白原核表達條件的優(yōu)化與蛋白純化[J]. 簡子健,馬素貞,申衛(wèi)紅,翟少華,趙森.  新疆農(nóng)業(yè)科學. 2012(02)
[4]熒光定量RT-PCR法對犬瘟熱病毒PS株感染犬血清和糞便中病毒的檢測[J]. 許紅麗,易立,王建科,楊莘,程世鵬.  中國預防獸醫(yī)學報. 2012(01)
[5]狂犬病流行現(xiàn)狀與防控對策[J]. 張永芳,李連任.  獸醫(yī)導刊. 2011(07)
[6]狂犬病病毒修飾基因組的構(gòu)建[J]. 魏玉榮,易忠,符子華,馬素貞,簡子健,胡爾瑪西,王海烽,魏婕,朱晶晶.  新疆農(nóng)業(yè)科學. 2010(06)
[7]應用重組PCR構(gòu)建豬源膜聯(lián)蛋白A2和增強型綠色熒光蛋白融合基因[J]. 陳江濤,吉艷紅,王光祥,尚佑軍,劉艷紅,劉湘濤.  西北農(nóng)業(yè)學報. 2010(01)
[8]應用體外重組PCR技術(shù)構(gòu)建Ppdc-ldh融合基因[J]. 高年發(fā),王勇,高強,張健,張淼.  中國釀造. 2009(06)
[9]狂犬病病毒口服疫苗株SRV9全長基因質(zhì)粒的構(gòu)建[J]. 魏玉榮,易忠,符子華,馬素貞,王曉萍,簡子健,王海烽,魏婕.  新疆農(nóng)業(yè)科學. 2009(01)
[10]犬瘟熱病毒基因變異及其細胞受體研究進展[J]. 趙建軍,閆喜軍,吳威.  微生物學報. 2008(07)

博士論文
[1]表達狂犬病病毒G蛋白重組犬瘟熱弱毒疫苗株的研究[D]. 王喜軍.中國農(nóng)業(yè)科學院 2012
[2]不同宿主來源犬瘟熱病毒遺傳分析與生物學特性研究[D]. 李天松.吉林農(nóng)業(yè)大學 2012
[3]綠色熒光蛋白基因在蘇云金芽胞桿菌中的表達與應用[D]. 周琴.華中農(nóng)業(yè)大學 2004
[4]綠色熒光蛋白基因gfp在華癸中生根瘤菌與紫云英共生固氮體系研究中的應用[D]. 史巧娟.華中農(nóng)業(yè)大學 2000

碩士論文
[1]狂犬病病毒SRV9株反向遺傳系統(tǒng)的建立與初步應用研究[D]. 金宏麗.吉林大學 2013
[2]狂犬病病毒SRV9株糖蛋白333位氨基酸變異對免疫原性的影響[D]. 孫程龍.吉林大學 2012
[3]犬瘟熱病毒主要結(jié)構(gòu)蛋白基因在昆蟲細胞中的表達及間接ELISA檢測方法的建立[D]. 馮佩平.吉林農(nóng)業(yè)大學 2012
[4]狂犬病病毒rSRV9減毒株口服脂質(zhì)體凍干活疫苗的研究及免疫效價的測定[D]. 翟少華.新疆農(nóng)業(yè)大學 2012
[5]綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因裸鼠的應用[D]. 閆寒.北京協(xié)和醫(yī)學院 2012
[6]犬瘟熱病毒單克隆抗體的制備及其應用[D]. 畢振威.南京農(nóng)業(yè)大學 2012
[7]抗犬瘟熱病毒P1蛋白單克隆抗體的制備及初步應用[D]. 于萍萍.山東農(nóng)業(yè)大學 2011
[8]狂犬病病毒P蛋白的原核表達及間接ELISA檢測方法的建立[D]. 趙剛.湖南農(nóng)業(yè)大學 2010
[9]犬瘟熱病毒N蛋白基因的克隆、原核表達及其重組蛋白的抗原性研究[D]. 申衛(wèi)紅.新疆農(nóng)業(yè)大學 2010
[10]表達綠色熒光蛋白重組狂犬病病毒Flury-LEP的構(gòu)建及其用于中和抗體檢測的研究[D]. 華濤.南京農(nóng)業(yè)大學 2009



本文編號：3508425