熱休克蛋白（heat shock proteins, HSPs）是組織細胞在應(yīng)激因素刺激下所產(chǎn)生的一組高度保守的蛋白家族，它不僅在機體各種應(yīng)激狀態(tài)下會過量表達，在某些腫瘤組織中也會出現(xiàn)異常表達，參與腫瘤細胞的增殖、凋亡、耐藥機制及與腫瘤相關(guān)的免疫反應(yīng),與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。而作為重要代表成員之一的HSP60，對其在腫瘤發(fā)病學(xué)中的表達和作用的研究則較少，尤其在禽腫瘤性疾病中的研究國內(nèi)尚未見報道。基于以上背景，本研究取1日齡SPF雛雞分為MDV-RB1B病毒接種組，HVT疫苗免疫組及無感染、無免疫空白對照組，3組均依次接種ND＋H9AI滅活和ND弱毒疫苗，成功建立雞MD腫瘤模型。各組定期采外周血通過HA/HI方法測定血清中ND和H9AI的抗體滴度，反映MDV引起的免疫抑制情況，ELISA方法檢測血清中HSP60抗體含量的動態(tài)變化；定期剖殺采集主要器官組織，制作石蠟切片，HE染色以觀察組織病理學(xué)變化，免疫組織化學(xué)染色檢測HSP60在各器官組織中的分布，ELISA檢測組織內(nèi)HSP60含量的動態(tài)變化，實時FQ RT-PCR技術(shù)定量檢測組織內(nèi)HSP60mRNA的轉(zhuǎn)錄水平。分析在腫瘤發(fā)病機體內(nèi)... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
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中文摘要
Abstract
1 引言
    1.1 熱休克蛋白在腫瘤中的研究進展
    1.2 熱休克蛋白 60（HSP60）的分布
    1.3 HSP60 的分子生物學(xué)特點
        1.3.1 HSP60 的基因特點
        1.3.2 HSP60 的轉(zhuǎn)錄調(diào)控
        1.3.3 HSP60 mRNA 的翻譯表達
        1.3.4 HSP10
    1.4 HSP60 的生物學(xué)功能
        1.4.1 HSP60 的結(jié)構(gòu)特點
        1.4.2 HSP60 的分子伴侶機制
        1.4.3 HSP60 與蛋白構(gòu)象的形成及修復(fù)
        1.4.4 HSP60 與蛋白轉(zhuǎn)運
        1.4.5 HSP60 與細胞應(yīng)激
    1.5 HSP60 引起的免疫反應(yīng)
    1.6 HSP60 與腫瘤
        1.6.1 HSP60 在腫瘤中的表達
        1.6.2 HSP60 與腫瘤細胞凋亡
        1.6.3 HSP60 與腫瘤治療
        1.6.4 HSP60 與腫瘤免疫
    1.7 馬立克氏病概況
    1.8 本課題研究的目的及意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 主要試劑和儀器
        2.1.2 主要試劑的配制
        2.1.3 玻片的處理
        2.1.4 病毒
        2.1.5 疫苗
        2.1.6 實驗動物
    2.2 方法
        2.2.1 雞馬立克氏病動物模型的建立
        2.2.3 MD 發(fā)病雞腫瘤組織中 HSP60 定位檢測
        2.2.4 MD 發(fā)病雞組織中 HSP60 表達水平動態(tài)變化檢測（ELISA）
        2.2.5 MD 發(fā)病雞組織中 HSP60 mRNA 轉(zhuǎn)錄水平動態(tài)變化檢測
        2.2.6 分析及統(tǒng)計
3 結(jié)果與分析
    3.1 MD 動物模型的建立
        3.1.1 MD 發(fā)病雞剖檢變化
        3.1.2 MD 發(fā)病組織的病理檢查結(jié)果
        3.1.3 MD 對 ND 和 H9 流感體液免疫影響的檢測結(jié)果
    3.2 MD 發(fā)病雞血清中 HSP60 抗體動態(tài)檢測結(jié)果
    3.3 MD 發(fā)病雞腫瘤組織中 HSP60 的定位和分布情況
    3.4 MD 發(fā)病雞組織中 HSP60 表達水平的動態(tài)變化結(jié)果
        3.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線
        3.4.2 心臟中 HSP60 的表達
        3.4.3 肝臟中 HSP60 的表達
        3.4.4 脾臟中 HSP60 的表達
        3.4.5 肺臟中 HSP60 的表達
        3.4.6 腎臟中 HSP60 的表達
    3.5 MD 發(fā)病雞組織細胞中 HSP mRNA 轉(zhuǎn)錄水平的動態(tài)變化結(jié)果
        3.5.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作
        3.5.2 熒光定量標(biāo)準(zhǔn)曲線
        3.5.3 HSP60mRNA 轉(zhuǎn)錄水平的變化
4 討論
    4.1 雞馬立克氏病腫瘤模型的成功建立
        4.1.1 MD 動物模型成功確定
        4.1.2 MD 的免疫抑制作用
    4.2 MD 發(fā)病雞 HSP60 的高表達和組織定位
        4.2.1 MD 發(fā)病雞 HSP60 的高表達
        4.2.2 MD 發(fā)病雞 HSP60 的組織定位
    4.3 MD 發(fā)病雞 HSP60mRNA 的高轉(zhuǎn)錄
        4.3.1 一步法 RT-PCR 實時熒光染料法
        4.3.2 MD 發(fā)病雞 HSP60mRNA 的高轉(zhuǎn)錄
5 結(jié)論
參考文獻
致謝
碩士期間發(fā)表論文


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3504177