牛GV期卵母細胞相對于成熟卵母細胞的冷凍保存要困難很多,但在遠距離運輸卵母細胞時,必須進行冷凍保存。因此,開發(fā)GV期卵母細胞冷凍保存技術對于充分利用未成熟卵母細胞、特別是遠距離屠宰場卵巢卵母細胞保存具有重要的現(xiàn)實意義。海藻糖（trehalose）是一種類似于蔗糖的非還原性雙糖,能形成玻璃狀保護層保護處于極端條件下的生命體,因此探索海藻糖作為非滲透性冷凍保護劑替代常規(guī)玻璃化冷凍保護劑（CPA）中蔗糖、用于冷凍保存GV期卵母細胞的可能性,并找到最適替代濃度是本研究的目的之一。有研究證明,常規(guī)溶解冷凍保護劑的緩沖介質DPBS（杜氏磷酸鹽緩沖液）中的主要成分NaCl,對胚胎的超低溫冷凍具有一定的危害,但其對卵母細胞尤其是GV期卵母細胞的保護作用未見報道。因此,本研究的目的之二,是以氯化膽堿代替NaCl,以及聯(lián)合海藻糖和氯化膽堿用于GV期卵母細胞的冷凍保存,探索其保護效果。此外,本研究的目的之三,是研究冷凍損傷的機制,凋亡基因和周期基因相對表達量的差異性。研究內容和結果如下：1.不同濃度海藻糖對牛GV期卵母細胞玻璃化冷凍的效果（1）在對不同濃度海藻糖作為非滲透性保護劑對卵母細胞存活能力評價的實驗... 

【文章來源】：華中農業(yè)大學湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
文獻綜述
    1 牛卵母細胞冷凍保存研究進展
        1.1 牛卵母細胞冷凍保存研究現(xiàn)狀
        1.2 卵母細胞冷凍保存的技術方法
        1.3 玻璃化冷凍保存研究進展
        1.4 冷凍保護劑
    2 海藻糖在卵母細胞玻璃化冷凍中的應用
        2.1 海藻糖的結構和性質
        2.2 海藻糖在哺乳動物卵母細胞玻璃化冷凍中的應用
    3 氯化膽堿在胚胎或卵母細胞冷凍中的應用及優(yōu)勢
        3.1 氯化膽堿在胚胎和配子冷凍中的應用
        3.2 卵母細胞冷凍液母液中氯化膽堿替代氯化鈉的優(yōu)勢原因
    4 玻璃化冷凍對卵母細胞結構、細胞器和發(fā)育潛力的影響
        4.1 玻璃化冷凍對卵母細胞細胞骨架及染色體的影響
        4.2 玻璃化冷凍對卵母細胞細胞膜的影響
        4.3 玻璃化冷凍對卵母細胞透明帶的影響
        4.4 玻璃化冷凍對卵母細胞線粒體的影響
        4.5 玻璃化冷凍對卵母細胞的分子損傷的影響
    5 本實驗的研究目的及意義
第一章 不同濃度海藻糖對牛GV期卵母細胞冷凍的效果
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 材料
        2.2 方法
        2.3 統(tǒng)計分析
    3 結果與分析
        3.1 冷凍對卵母細胞存活能力的影響
        3.2 冷凍對卵母細胞透明帶的影響
        3.3 冷凍對卵母細胞細胞器的影響
        3.4 冷凍對卵丘細胞擴展的影響
        3.5 冷凍對卵母細胞發(fā)育潛力的影響
    4 討論
        4.1 卵母細胞存活能力的評價
        4.2 卵母細胞凍存后透明帶硬度的評價
        4.3 卵母細胞凍存后細胞器的評價
        4.4 卵母細胞凍融后卵丘擴展和發(fā)育能力的評價
    5 小結
第二章 牛GV期卵母細胞冷凍損傷的分子機制
    1 前言
    2 實驗材料與方法
        2.1 實驗材料
        2.2 實驗方法
    3 結果與分析
        3.1 冷凍對卵母細胞凋亡的影響
        3.2 冷凍對卵母細胞凋亡和周期基因mRNA表達量的影響
    4 討論
    5 小結
第三章 改良磷酸鹽緩沖液(mPBS)配制玻璃化冷凍液冷凍卵母細胞效果評價
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 材料
        2.2 方法
    3 結果與分析
        3.1 以mPBS配制玻璃化冷凍保護劑,冷凍對卵母細胞存活能力的影響
        3.2 以mPBS配制玻璃化冷凍保護劑,冷凍對卵母細胞透明帶硬度的影響
        3.3 以mPBS配制玻璃化冷凍保護劑,冷凍對卵母細胞發(fā)育潛力的影響
        3.4 以mPBS配制玻璃化冷凍保護劑,冷凍對卵母細胞凋亡和周期基因mRNA表達量的影響
    4 討論
        4.1 卵母細胞凍融后活力評價
        4.2 卵母細胞凍融后透明帶硬度評價
        4.3 卵母細胞凍融后發(fā)育能力的評價
        4.4 卵母細胞凍融后細胞凋亡和細胞周期基因mRNA表達量評價
    5 小結
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]海藻糖抗凍保護作用研究進展[J]. 廖丹,陳雪,張原.  廣東農業(yè)科學. 2011(18)
[2]牛卵母細胞玻璃化冷凍對基因mRNA表達量的影響[J]. 林嘉鵬,王靜,趙云程,陳童,汪立芹,陳博,黃俊成.  中國實驗動物學報. 2011(02)
[3]牛羊卵母細胞玻璃化冷凍保存的研究進展[J]. 莫顯紅,李俊杰,桑潤滋,溫兵強.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2011(07)
[4]海藻糖用于玻璃化冷凍卵母細胞的研究[J]. 王念念,劉雨生.  國際生殖健康/計劃生育雜志. 2009(03)
[5]開放式拉長細管冷凍法對牛卵母細胞體外受精后發(fā)育的影響[J]. 禹學禮,鄧雯,龐有志,王新莊,昝林森,李曉霞,冉林武.  畜牧獸醫(yī)學報. 2005(03)
[6]3種因素對牛卵母細胞玻璃毛細管玻璃化冷凍效果的影響研究[J]. 包華瓊,李躍民,王新莊,張世生,金立方,張德芳.  動物醫(yī)學進展. 2004(06)
[7]OPS玻璃化冷凍對山羊卵母細胞超微結構的影響[J]. 劉海軍,張美佳,侯蓉,張志和,王基山,蘭景超,錢菊汾,張安居.  西北農林科技大學學報(自然科學版). 2001(03)
[8]卵子凍存技術[J]. 李媛.  國外醫(yī)學.婦產科學分冊. 1996(06)
[9]牛體外成熟卵母細胞冷凍保存的研究[J]. 馮懷亮,孫青原,李子義,楊慶章,劉國藝,秦鵬春.  畜牧獸醫(yī)學報. 1995(06)

博士論文
[1]丙酮酸調控小鼠卵母細胞排卵后老化的研究[D]. 劉娜.山東農業(yè)大學 2008
[2]玻璃化冷凍技術的實驗研究[D]. 王雁林.華中科技大學 2006

碩士論文
[1]TSA與5-aza-dc對早期牛孤雄胚體外發(fā)育的作用[D]. 王曉民.華中農業(yè)大學 2011
[2]豬MⅡ期卵母細胞玻璃化冷凍的研究[D]. 陸文昊.安徽農業(yè)大學 2010
[3]奶牛卵母細胞玻璃化冷凍方法及胚胎程序化冷凍研究[D]. 王珂.甘肅農業(yè)大學 2008
[4]水牛卵母細胞快速玻璃化冷凍保存的研究[D]. 唐業(yè)剛.西南大學 2006
[5]小鼠孵化囊胚和豬囊胚玻璃化冷凍保存技術的研究[D]. 周崇.中國農業(yè)大學 2003



本文編號：3490390