本文關(guān)鍵詞：克氏偽裸頭絳蟲的鑒定及其遺傳變異研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：克氏偽裸頭絳蟲(Pseudanoplocephala crawfordi)是一種重要的人獸共患絳蟲,該絳蟲最初發(fā)現(xiàn)于斯里蘭卡野豬體內(nèi),之后相繼發(fā)現(xiàn)于印度、中國、日本的豬體內(nèi),其主要寄生在豬小腸內(nèi),引起仔豬生長發(fā)育受阻、消瘦、腹痛和腹瀉甚至死亡,降低飼料轉(zhuǎn)化率,對養(yǎng)殖業(yè)造成重大的經(jīng)濟損失。人可因誤食含有該絳蟲幼蟲的赤擬谷盜等昆蟲而感染,目前國內(nèi)已有21例人感染的報道。準確鑒定該絳蟲和明確其種群遺傳特征是制定預(yù)防和控制克氏偽裸頭絳蟲對人和動物危害有效措施的關(guān)鍵。基于此,本論文從以下四個方面研究了克氏偽裸頭絳蟲的鑒定方法和遺傳變異特點。1.通過對采自陜西楊凌自然感染的豬體內(nèi)的克氏偽裸頭絳蟲不同染色和形態(tài)學觀察發(fā)現(xiàn),蘇木精染液對成蟲的頭節(jié)、頸節(jié)、幼節(jié)和成節(jié)效果較好,而齊氏石碳酸品紅染液對孕卵節(jié)片較為理想。通過觀察蟲體標本,初步鑒定為克氏偽裸頭絳蟲。2.擴增克氏偽裸頭絳蟲核糖體DNA內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(ITS rDNA)并克隆、測序和序列分析,發(fā)現(xiàn)克氏偽裸頭絳蟲ITS全長為1586 bp,其中ITS1為757 bp,5.8S為201 bp,ITS2為628 bp。分別基于ITS1和ITS2構(gòu)建絳蟲種系發(fā)育樹,可見克氏偽裸頭絳蟲與膜殼屬絳蟲聚在一起,表明克氏偽裸頭絳蟲可能屬于膜殼屬。3.擴增克氏偽裸頭絳蟲細胞色素C氧化酶亞基1基因部分片段(pcox1)和煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)脫氫酶亞單位1基因(nad1)部分片段(pnad1),并測序和序列分析,發(fā)現(xiàn)pcox1和pnad1長度分別為380 bp和458 bp。分別基于pcox1和pnad1構(gòu)建進化樹,發(fā)現(xiàn)pcox1可能不適合作為分子標記,而pnad1適合作為遺傳標記來研究絳蟲的種系發(fā)育。4.測定和分析了克氏偽裸頭絳蟲線粒體全基因組,發(fā)現(xiàn)該絳蟲線粒體全基因組全長14192 bp,共編碼36個基因,其中12個蛋白編碼基因,2個核糖體RNA基因和22個轉(zhuǎn)移RNA。基因的排列順序與縮小膜殼絳蟲完全一致,而與其他絳蟲僅有有2個tNAR基因排列順序相顛倒。基于12個蛋白編碼基因氨基酸序列重建絳蟲種系發(fā)育樹,表明克氏偽裸頭絳蟲可能屬于膜殼屬,并與縮小膜殼絳蟲親緣關(guān)系最近。5.擴增和測定了河南洛陽、濟源和陜西楊凌地區(qū)豬的克氏偽裸頭絳蟲分離株線粒體cox3基因的部分片段(pcox3)、nad4基因的部分片段(pnad4)和cytb基因的部分片段(pcytb),然后通過合并pcox3、pnad4和pcytb三段序列重建了克氏偽裸頭絳蟲與其它絳蟲的種群遺傳關(guān)系。發(fā)現(xiàn)克氏偽裸頭絳蟲pcox3、pnad4和pcytb擴增片段的長度分別為503 bp、604 bp和690 bp;克氏偽裸頭絳蟲線粒體三段基因pcox3、pnad4和pcytb的不同地域種內(nèi)序列差異分別為0~1.83%、0~1.52%和0~1.51%;基于合并cox3、nad4和cytb三段基因重構(gòu)種系發(fā)育樹發(fā)現(xiàn),不同地區(qū)克氏偽裸頭絳蟲分離株聚在一起,并與縮小膜殼絳蟲形成姊妹支,而所有的克氏偽裸頭絳蟲分離株又形成兩個小的分支。表明克氏偽裸頭絳蟲可能存在兩個種群,并且與縮小膜殼絳蟲親緣關(guān)系最近。
【關(guān)鍵詞】：克氏偽裸頭絳蟲 鑒定 遺傳變異 線粒體基因組
【學位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S852.7
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-13
• 文獻綜述13-19
• 第一章 克氏偽裸頭絳蟲研究概況13-19
• 1.1 克氏偽裸頭絳蟲13-14
• 1.1.1 分類學地位13
• 1.1.2 形態(tài)學和生活史13
• 1.1.3 生活史13-14
• 1.2 克氏偽裸頭絳蟲病14-15
• 1.2.1 流行病學研究14
• 1.2.2 診斷14
• 1.2.3 防治14-15
• 1.3 寄生蟲分子分類的研究15-16
• 1.3.1 聚合酶鏈式反應(yīng) 限制性片斷長度多態(tài)性（PCR RFLP）15
• 1.3.2 長PCR（Long-range PCR）擴增技術(shù)15-16
• 1.4 絳蟲分類學和分子遺傳學研究16-18
• 1.4.1 形態(tài)學分類研究16
• 1.4.2 分子生物學分類及遺傳學研究16-18
• 1.4.2.1 核糖體基因特點及在蠕蟲研究中的應(yīng)用16-17
• 1.4.2.2 線粒體基因特點及在蠕蟲蟲研究中的應(yīng)用17-18
• 1.5 本研究的目的和意義18-19
• 試驗研究19-48
• 第二章 克氏偽裸頭絳蟲形態(tài)學觀察19-23
• 2.1 材料與方法19-20
• 2.1.1 材料19
• 2.1.1.1 蟲種19
• 2.1.1.2 主要試劑19
• 2.1.1.3 溶液及其配制19
• 2.1.1.4 主要儀器19
• 2.1.2 方法19-20
• 2.1.2.1 蟲體采集及處理19-20
• 2.1.2.2 染色鏡檢20
• 2.1.2.3 形態(tài)學觀察20
• 2.2 結(jié)果20-22
• 2.2.1 克氏偽裸頭絳蟲標本的制作20
• 2.2.2 頭節(jié)的形態(tài)學結(jié)構(gòu)20-21
• 2.2.3 體節(jié)（幼節(jié)、成節(jié)和孕節(jié)）的形態(tài)學觀察21-22
• 2.3 討論22
• 2.4 小結(jié)22-23
• 第三章 克氏偽裸頭絳蟲ITS、cox1和nad1基因的擴增與種系發(fā)育分析23-34
• 3.1 材料與方法23-29
• 3.1.1 材料23-24
• 3.1.1.1 蟲種23
• 3.1.1.2 主要試劑23
• 3.1.1.3 溶液及其配制23-24
• 3.1.1.4 主要儀器24
• 3.1.2 方法24-29
• 3.1.2.1 蟲體鑒定和DNA提取24-25
• 3.1.2.2 樣品ITS rDNA的擴增25-26
• 3.1.2.3 PCR產(chǎn)物的檢測26
• 3.1.2.4 PCR產(chǎn)物純化回收26-27
• 3.1.2.5 純化PCR產(chǎn)物的連接27
• 3.1.2.6 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化27-28
• 3.1.2.7 轉(zhuǎn)化子菌液鑒定28
• 3.1.2.8 測序及進化分析28-29
• 3.2 結(jié)果29-32
• 3.2.1 ITS擴增結(jié)果29
• 3.2.2 cox1和nad1基因PCR擴增結(jié)果29-30
• 3.2.3 克氏偽裸頭絳蟲ITS rDNA序列分析30
• 3.2.4 克氏偽裸頭絳蟲pcox1和pnad1基因序列分析30
• 3.2.5 基于ITS rDNA序列的種系發(fā)育分析30-31
• 3.2.6 基于pcox1和pnad1基因的種系發(fā)育關(guān)系分析31-32
• 3.3 討論32-33
• 3.4 小結(jié)33-34
• 第四章 克氏偽裸頭絳蟲線粒體基因組分析34-42
• 4.1 材料與方法34-37
• 4.1.1 材料34
• 4.1.1.1 蟲種34
• 4.1.1.2 主要試劑34
• 4.1.1.3 溶液配制34
• 4.1.1.4 主要儀器34
• 4.1.2 方法34-37
• 4.1.2.1 樣品處理、鑒定及DNA提取34
• 4.1.2.2 引物設(shè)計34-35
• 4.1.2.3 克氏偽裸頭絳蟲線粒體基因組長PCR擴增方法35-36
• 4.1.2.4 PCR產(chǎn)物的回收36
• 4.1.2.5 純化PCR產(chǎn)物的連接36
• 4.1.2.6 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化36
• 4.1.2.7 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的克隆及菌液PCR鑒定36
• 4.1.2.8 克氏偽裸頭絳蟲線粒體基因組序列分析36-37
• 4.1.2.9 基于線粒體基因組的線蟲系統(tǒng)進化樹重構(gòu)37
• 4.2 結(jié)果37-41
• 4.2.1 細頸線蟲線粒體基因組的組成37
• 4.2.2 蛋白質(zhì)編碼基因分析37-38
• 4.2.3 基于線粒體基因組的線蟲系統(tǒng)進化分析38-41
• 4.3 討論41
• 4.4 小結(jié)41-42
• 第五章 克氏偽裸頭絳蟲線粒體cox3、nad4和cytb基因多態(tài)性研究42-48
• 5.1 材料與方法42-43
• 5.1.1 材料42-43
• 5.1.1.1 蟲種42
• 5.1.1.2 主要試劑、溶液和儀器42-43
• 5.1.2 方法43
• 5.1.2.1 樣品處理、鑒定及DNA提取43
• 5.1.2.2 樣品cox3、nad4和cytb基因的擴增43
• 5.1.2.3 序列分析及系統(tǒng)進化樹重構(gòu)43
• 5.2 結(jié)果43-46
• 5.2.1 克氏偽裸頭絳蟲cox3、nad4和cytb基因PCR擴增結(jié)果43-45
• 5.2.2 測序結(jié)果及序列分析45
• 5.2.3 種群系統(tǒng)進化分析45-46
• 5.3 討論46-47
• 5.4 小結(jié)47-48
• 結(jié)論48-49
• 參考文獻49-54
• 附錄54-59
• 附錄1 克氏偽裸頭絳蟲ITS序列54-55
• 1.1 克氏偽裸頭絳蟲ITS1序列54
• 1.2 克氏偽裸頭絳蟲 5.8 S序列54
• 1.3 克氏偽裸頭絳蟲ITS2序列54-55
• 附錄2 克氏偽裸頭絳蟲線粒體基因組序列55-59
• 2.1 克氏偽裸頭絳蟲線粒體基因組序列55-59
• 致謝59-60
• 作者簡介60

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本文編號：348378