為了探索梅花鹿-牛異種體細(xì)胞核移植技術(shù)，為梅花鹿胚胎工程研究奠定技術(shù)基礎(chǔ)，本論文對(duì)其供核細(xì)胞的培養(yǎng)和冷凍保存、受體卵母細(xì)胞的體外成熟、顯微操作、重組胚胎外培養(yǎng)等技術(shù)環(huán)節(jié)進(jìn)行了探索研究，并在水貂、藍(lán)狐和貉等毛皮動(dòng)物上驗(yàn)證了建立的異種體細(xì)胞核移植技術(shù)體系。主要內(nèi)容如下：（1）梅花鹿、水貂、藍(lán)狐和貉耳皮膚成纖維細(xì)胞（Ear Skin Fibriblasts，ESF）經(jīng)組織塊法原代培養(yǎng)，利用酶消化時(shí)間差與貼壁時(shí)間差法處理3～5次純化，結(jié)果顯示細(xì)胞生長(zhǎng)特點(diǎn)為貼壁生長(zhǎng)、呈梭形、具偽足，F(xiàn)5代細(xì)胞生長(zhǎng)曲線呈“潛伏期-對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期-停滯期”的模式。DMSO作為抗凍保護(hù)劑時(shí)，梅花鹿、水貂、藍(lán)狐和貉ESF解凍復(fù)蘇后復(fù)蘇率分別為89.64%、92.44、91.24和91.04，顯著高于甘油作為抗凍保護(hù)劑。結(jié)論：梅花鹿、水貂、藍(lán)狐和貉ESF具有典型的皮膚成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)特點(diǎn)，通過(guò)酶消化時(shí)間與貼壁時(shí)間差的方法對(duì)其純化可行，冷凍保存時(shí)可采用10%DMSO作為抗凍保護(hù)劑。（2）牛卵丘-卵母細(xì)胞復(fù)合體（Cumulus Oocyte Complexes，COCs）經(jīng)22h體外成熟培養(yǎng)之后，LH+FSH和PMSG+HCG組成... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：91 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表
第一章 緒論
    1.1 梅花鹿的繁殖特點(diǎn)及繁育生物技術(shù)
        1.1.1 梅花鹿的繁殖特點(diǎn)
        1.1.2 梅花鹿的繁育生物技術(shù)
    1.2 水貂、藍(lán)狐及貉的經(jīng)濟(jì)價(jià)值與繁育生物技術(shù)
        1.2.1 水貂的經(jīng)濟(jì)價(jià)值與繁育生物技術(shù)
        1.2.2 藍(lán)狐和貉的經(jīng)濟(jì)價(jià)值與繁育生物技術(shù)
    1.3 異種體細(xì)胞核移植技術(shù)研究進(jìn)展
        1.3.1 ISCNT 研究歷史
        1.3.2 ISCNT 關(guān)鍵技術(shù)環(huán)節(jié)
        1.3.3 ISCNT 的研究意義
        1.3.4 ISCNT 研究存在的問(wèn)題
    1.4 本研究的內(nèi)容、目的及意義
        1.4.1 梅花鹿、水貂、藍(lán)狐和貉耳皮膚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)及冷凍保存
        1.4.2 牛卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)條件的優(yōu)化
        1.4.3 梅花鹿-牛 ISCNT 技術(shù)方法的研究
        1.4.4 水貂、藍(lán)狐及貉-牛 ISCNT 胚胎的制備
第二章 供核細(xì)胞培養(yǎng)及冷凍保存
    2.1 材料和方法
        2.1.1 材料
        2.1.2 方法
        2.1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
        2.1.4 統(tǒng)計(jì)分析
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 梅花鹿、水貂、藍(lán)狐和貉耳皮膚成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)特性
        2.2.3 DMSO 和甘油對(duì)不同供核細(xì)胞的冷凍保護(hù)效果
    2.3 討論
        2.3.1 梅花鹿、水貂、藍(lán)狐和貉耳皮膚成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.3.2 梅花鹿、水貂、藍(lán)狐和貉耳皮膚成纖維細(xì)胞的純化
        2.3.3 梅花鹿、水貂、藍(lán)狐和貉耳皮膚成纖維細(xì)胞的冷凍保存
    2.4 小結(jié)
第三章 牛卵母細(xì)胞體外成熟體系的優(yōu)化
    3.1 材料和方法
        3.1.1 材料
        3.1.2 方法
        3.1.3 測(cè)定指標(biāo)與評(píng)定方法
        3.1.4 統(tǒng)計(jì)分析
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 不同激素組合對(duì)牛卵母細(xì)胞體外成熟的影響
        3.2.2 BCB 染色優(yōu)選牛卵母細(xì)胞體外成熟
        3.2.3 EGF 對(duì)牛卵母細(xì)胞體外成熟的影響
    3.3 討論
        3.3.1 激素對(duì)牛卵母細(xì)胞體外成熟的影響
        3.3.2 BCB 染色對(duì)牛卵母細(xì)胞體外成熟的作用
        3.3.3 EGF 對(duì)牛卵母細(xì)胞體外成熟的影響
    3.4 小結(jié)
第四章 梅花鹿-牛 ISCNT 技術(shù)研究
    4.1 材料和方法
        4.1.1 材料
        4.1.2 方法
        4.1.4 統(tǒng)計(jì)分析
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 DEME 誘導(dǎo)牛卵母細(xì)胞顯核的研究
        4.2.2 梅花鹿-牛 ISCNT 顯微操作的研究
        4.2.3 梅花鹿-牛 ISCNT 胚胎體外培養(yǎng)的研究
    4.3 討論
        4.3.1 DEME 處理對(duì)牛卵母細(xì)胞顯核的影響
        4.3.2 梅花鹿-牛 ISCNT 顯微操作
        4.3.3 梅花鹿-牛 ISCNT 胚胎體外培養(yǎng)
    4.4 小結(jié)
第五章 水貂、藍(lán)狐及貉-牛 ISCNT 胚胎的制備
    5.1 材料和方法
        5.1.1 材料
        5.1.2 方法
        5.1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
        5.1.4 統(tǒng)計(jì)分析
    5.2 結(jié)果與分析
        5.2.1 供核細(xì)胞對(duì)全細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)注射制備 ISCNT 胚胎的影響
        5.2.2 共培養(yǎng)對(duì)毛皮動(dòng)物-牛 ISCNT 胚胎體外發(fā)育的影響
    5.3 討論
        5.3.1 供核細(xì)胞對(duì)全細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)注射制備 ISCNT 胚胎的影響
        5.3.2 共培養(yǎng)對(duì)水貂、藍(lán)狐及貉-牛 ISCNT 胚胎體外發(fā)育的影響
    5.4 小結(jié)
第六章 全文結(jié)論
    6.1 結(jié)論
    6.2 研究的創(chuàng)新點(diǎn)
    6.3 后續(xù)研究工作
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3482053