無角間性綜合癥（Polled Intersex Syndrome，PIS）是由于一段位于1q23的11.7kbDNA序列的缺失導(dǎo)致山羊無角與間性緊密連鎖的一種疾病。研究發(fā)現(xiàn)，11.7kb的DNA片段為非編碼序列，但表現(xiàn)出轉(zhuǎn)錄調(diào)控的作用，被調(diào)控的基因至少存在2個：PIS區(qū)調(diào)控的第一個轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物PISRT1（PIS regulated transcript number1）和叉頭蛋白FOXL2（forkhead box L2）。山羊PISRT1基因不編碼蛋白質(zhì)，在轉(zhuǎn)錄水平發(fā)揮其功能，目前已初步認定為睪丸抑制因子。FOXL2基因編碼一個典型的叉頭蛋白轉(zhuǎn)錄因子，具有決定卵巢發(fā)育的作用。PIS區(qū)域的缺失并不是引起山羊間性的唯一原因，為探究山羊間性的作用機制，本研究從唐山奶山羊的性別鑒定入手，探究了奶山羊性別遺傳學(xué)基礎(chǔ)；對PISRT1和FOXL2基因多態(tài)性進行分析并探究兩基因在間性和正常奶山羊中的變異差異以及兩基因的相互作用關(guān)系；使用生物信息學(xué)軟件預(yù)測了山羊PISRT1、FOXL2基因的啟動子區(qū)，并對FOXL2基因啟動子區(qū)進行了活性分析。通過對34只間性奶山羊性別決定基因SRY的PCR擴增結(jié)果表明，... 

【文章來源】：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)河北省

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

PIS區(qū)域結(jié)構(gòu)圖

及來源28 個正常唐山奶山羊血樣和 33 個間性唐山奶山羊血樣均由實大腸桿菌 DH5α 菌種由本實驗室凍存。MD 19-T 載體為寶生物工程有限公司產(chǎn)品；綠色熒光蛋白質(zhì)粒asic 、pGL3-Control、PRL-TK 載體均由北京原平皓生物技術(shù) 載體缺失真核啟動子及增強子等轉(zhuǎn)錄元件，但包含多種酶切位0 poly A 信號（如圖 2-1）。因此，pGL3-Basic 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細胞后因上游酶切位點插入的目的基因片段是否具有轉(zhuǎn)錄活性。pG的 Luc 基因上游插入了 SV40 啟動子并且在下游插入了 SV40 的細胞中會表達熒光素酶 Luc 報告基因；PRL-TK 載體有 HSV種細胞中組成性的表達海腎熒光素酶，同樣該質(zhì)粒由北京原平

表 2-3 擴增山羊 PISRT1 基因序列引物Table 2-3 Primers for amplification of PISRT1 gene in goat名稱 引物序列 產(chǎn)物長度PIS1-1S CTGGGTATCTAGATGGATGAGGCPIS1-1A CCATGTGTCTGAACCCCAGTC745bpPISrt1-2S GATGTTTATGTGTGCACGCTCCPISrt1-2A ACCGAGGAGGAAATTCACACAG820bpPISrt1-3S CACTTTCTGGCATGATGGATGGPISrt1-3A CCTTCACTTGCCTTCTTGCCTC720bp 啟動子生物信息學(xué)分析于 PISRT1 和 FOXL2 基因的生物信息學(xué)分析主要由以下三個方面組成：（1）確定基應(yīng)的轉(zhuǎn)錄本和其所對應(yīng)的蛋白質(zhì)，明確其 mRNA 和 gDNA 序列；（2）搜索及確定的 mRNA 序列；（3）利用生物信息學(xué)軟件對 PISRT1 基因和 FOXL2 基因 5'末端附近的行一系列的分析，如 CpG 島分析、核心啟動子預(yù)測、轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點的預(yù)測。如圖 2-2 所示：

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3481334