豬輪狀病毒（Porcine rotavirus,PRV）是導(dǎo)致仔豬發(fā)生病毒性腹瀉的主要病原之一。仔豬輪狀病毒腹瀉危害我國(guó)養(yǎng)豬業(yè),每年造成的經(jīng)濟(jì)損失巨大。現(xiàn)行疫苗在控制本病的發(fā)生與傳播上效果不佳,因此,開(kāi)發(fā)新型豬輪狀病毒疫苗是獸醫(yī)工作者義不容辭的責(zé)任。VP4是輪狀病毒的主要抗原蛋白,決定了病毒的P型。它能和VP7一樣獨(dú)立地誘導(dǎo)中和抗體,其中VP4經(jīng)胰酶裂解后形成的VP8*片段,含有VP4的主要中和性抗原表位,皆為線(xiàn)性且較為保守。理論上同一P型的輪狀病毒疫苗可以誘導(dǎo)抗不同G型的異型免疫,而從各大洲腹瀉仔豬身上分離到的輪狀病毒大都是類(lèi)Gottfried型（P[6]型）或者類(lèi)OSU型（P[7]型）。所以我們基于輪狀病毒P型的研究策略,并根據(jù)VP8*抗原表位圖譜,克隆和表達(dá)豬輪狀病毒Gottfried株（基因型G4P[6]）和SB-1A株（基因型G4P[7]）截短的VP8*基因（△VP8*,64-223位氨基酸）。同時(shí)分別向兩種△VP8*基因的上游引入編碼破傷風(fēng)毒素T細(xì)胞表位P2（破傷風(fēng)毒素的830⁸44位氨基酸）的序列,原核克隆表達(dá)P2-△VP8*基因。將四種重組蛋白的可... 

【文章來(lái)源】：黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)黑龍江省

【文章頁(yè)數(shù)】：66 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

成熟的RV粒子（三層衣殼）結(jié)構(gòu)示意圖

質(zhì)粒的鑒定組質(zhì)粒的酶切鑒定和菌液PCR鑒定圖 2-1 PRV Gottfried 株和 SB-1A 株△VP8*、P2-△VP8*基因 PCR 產(chǎn)物電泳L2000 Marker；1: Gottfried △VP8*基因的 PCR 產(chǎn)物；2: SB-1A △VP8*基物；3:陰性對(duì)照2000 Marker；1: P2-Gottfried △VP8*基因的 PCR 產(chǎn)物；2: P2-SB-1A △VP8產(chǎn)物；3:陰性對(duì)照1 Agarose gel electrophoresis of PCR products of PRV Gottfried strain and SB-1VP8* and P2-△VP8* gene DL2000 Marker; 1: PCR product of Gottfried △VP8* gene; 2: PCR product ofVP8* gene; 3: negative controlL2000 Marker; 1: PCR product of P2-Gottfried △VP8* gene; 2: PCR product △VP8* gene; 3: negative control

（2）重組質(zhì)粒的測(cè)序鑒定2.3.2（1）中鑒定正確的四種重組質(zhì)粒送北京六和華大基因科技股份有限公司測(cè)序果見(jiàn)附錄。（3）△VP8*基因的同源性比較0bp0bp0bp0bp0bp0bpM 1 2 3圖 2-3 重組質(zhì)粒 pET28a-P2-Gottfried △VP8*和pET28a-P2-SB-1A △VP8*的菌液 PCR 鑒定M: DL2000 Marker；1: pET28a-P2-Gottfried △VP8*的菌液 PCR鑒定產(chǎn)物；2: pET28a-P2-SB-1A △VP8*的菌液 PCR 鑒定產(chǎn)物；3: 陰性對(duì)照Fig. 2-3 Bacteria liquid PCR identification of the recombinantplasmids pET28a-P2-Gottfried △VP8* and pET28a-P2-SB-1A △VP8*

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]牛輪狀病毒病原流行病學(xué)調(diào)查、基因重配毒株的構(gòu)建及二價(jià)減毒株的免疫原性評(píng)價(jià)[D]. 常繼濤.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2009



本文編號(hào)：3480654