酶標二抗是一種伴隨著免疫檢測誕生的試劑,既擁有作為抗體的高度特異性和敏感性,又擁有可以高效催化酶底物的能力。對比直接進行免疫檢測的酶標一抗具有提高效率、降低成本、減少假陽性和信號級聯(lián)放大的作用。羊抗雞酶標二抗與同類產(chǎn)品相比具有諸多優(yōu)勢,以雞作為抗原的免疫宿主擁有更廣的抗原測定的范圍,將羊抗體作為二抗則擁有很大的市場前景。羊抗雞酶標二抗的制備有四個關鍵技術,即雞卵黃抗體的提純、羊免疫反應、羊血清（血漿）抗體的提純以及酶聯(lián)反應。本研究在綜合前人研究工作的基礎上,擬建立酶標二抗的制備方法。論文實驗結果如下:（1）以多個方法制備雞卵黃抗體IgY并對各方法進行比較。水稀釋-乙醇分級沉淀,氯仿-乙醇分級沉淀,氯仿-DEAE柱層析以及氯仿-硫酸銨二次沉淀法得到的蛋白質(zhì)純度分別:54%,55%,80%和91%。水稀釋-乙醇分級沉淀法IgY得率為11.99mg每個雞蛋,氯仿-乙醇分級沉淀法蛋白得率為16.50mg每個雞蛋,四種方法中IgY得率最高的是氯仿-硫酸銨二次沉淀法,每個雞蛋中可以提取17.26mg IgY。氯仿-DEAE柱層析法和氯仿-硫酸銨二次沉淀法都可以得到高純度IgY,但綜合效率和成本等因... 

【文章來源】：蘭州理工大學甘肅省

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 酶標抗體
        1.1.1 酶標抗體簡介
        1.1.2 酶標二抗
        1.1.3 酶標二抗的應用
    1.2 雞卵黃抗體
        1.2.1 雞卵黃抗體簡介
        1.2.2 雞卵黃抗體的提純
        1.2.3 抗體的純度檢測
    1.3 羊血清抗體
        1.3.1 羊血清抗體簡介
        1.3.2 羊血清抗體的純化
    1.4 辣根過氧化物酶
        1.4.1 辣根過氧化物酶簡介
        1.4.2 辣根過氧化物酶結構
        1.4.3 辣根過氧化物酶標記抗體
    1.5 酶標二抗效價的測定
    1.6 研究意義
    1.7 研究內(nèi)容
第二章 雞卵黃抗體的提純
    2.1 實驗器材
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 實驗試劑
        2.1.3 實驗主要儀器
        2.1.4 實驗主要試劑的配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 水稀釋-乙醇分級沉淀法提純IgY
        2.2.2 氯仿-乙醇分級沉淀法提純抗體
        2.2.3 二氯甲烷-乙醇分級沉降法提純抗體
        2.2.4 氯仿粗提-DEAE瓊脂糖凝膠柱層析法提純雞卵黃抗體
        2.2.5 氯仿-硫酸銨二次沉淀法提純雞卵黃抗體
        2.2.6 Bradford法檢測IgY樣品的蛋白質(zhì)濃度
        2.2.7 SDS-PAGE檢測IgY純度
    2.3 實驗結果與分析
        2.3.1 提純后的蛋白濃度及產(chǎn)率計算
        2.3.2 SDS-PAGE檢測IgY純度
        2.3.3 SDS-PAGE檢測氯仿粗提-DEAE柱層析法
        2.3.4 SDS-PAGE檢測氯仿-硫酸銨二次沉淀法結果
第三章 羊免疫反應
    3.1 實驗器材
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 實驗試劑
        3.1.3 實驗儀器
        3.1.4 實驗主要試劑的配制
    3.2 實驗方法
        3.2.1 羊免疫反應抗原制備方法
        3.2.2 羊免疫反應方法
        3.2.3 SDS-PAGE檢測IgY純度
        3.2.4 SDS-PAGE檢測羊血漿中的總蛋白
    3.3 實驗結果及分析
        3.3.1 一抗制備結果
        3.3.2 羊免疫反應
        3.3.3 羊血漿蛋白SDS-PAGE檢測
第四章 羊抗體的提純
    4.1 實驗器材
        4.1.1 實驗材料
        4.1.2 實驗試劑
        4.1.3 實驗儀器
        4.1.4 實驗主要試劑的配制
    4.2 實驗方法
        4.2.1 羊血漿的制備
        4.2.2 辛酸-硫酸銨法提取羊血漿中的抗體
        4.2.3 SDS-PAGE檢測IgG純度
    4.3 實驗結果及分析
第五章 HRP標記羊抗雞二抗及活性檢測
    5.1 實驗材料
        5.1.1 實驗材料
        5.1.2 實驗試劑
        5.1.3 實驗儀器
    5.2 實驗方法
        5.2.1 實驗主要試劑配制
        5.2.2 高碘酸鈉氧化法標記抗體
        5.2.3 Western Blot檢測酶標二抗活性
        5.2.4 HRP和酶標IgG化學發(fā)光檢測
    5.3 實驗結果及討論
結論
參考文獻
致謝
附錄A:攻讀學位期間所發(fā)表的學術論文目錄



本文編號：3477969