片形吸蟲�。╢ascioliasis）是由片形科、片形屬（Fasciola）吸蟲,如大片形吸蟲（Fasciola gigantica）、肝片形吸蟲（Fasciola hepatica）及其中間型（intermediate form）的感染引起的一種人獸共患寄生蟲病。大片形吸蟲病分布于熱帶和亞熱帶地區(qū),肝片形吸蟲病主要分布于溫帶地區(qū),給畜牧業(yè)生產帶來巨大的經濟損失,同時嚴重威脅公共衛(wèi)生安全。鈣結合蛋白（Calcium-binding protein,CaBp）屬于蠕蟲鈣結合蛋白家族,具有鈣結合位點,可通過與不同信號分子的結合在多種生物學過程中發(fā)揮作用,參與調節(jié)細胞存活、增殖、黏附、遷移、血管新生等多種腫瘤特征性生物學過程。亮氨酸氨基肽酶（Leucine aminopeptidases,LAPs）是一種廣泛存在于原核和真核細胞的金屬蛋白酶,是從蛋白質和肽段切割N端殘基而發(fā)揮作用的胞漿酶,具有消化、與宿主互作、蛋白質周轉、腫瘤生長、組織侵襲和新陳代謝等多種功能。本實驗通過采取形態(tài)學與分子生物學相結合的方法來進行大片形吸蟲的鑒定。鑒定正確后,以肝片形吸蟲CaBp2（Fh CaBp2）的序列為參... 

【文章來源】：黑龍江八一農墾大學黑龍江省

【文章頁數】：80 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 文獻綜述
    1.1 片形吸蟲病
        1.1.1 病原及其生活史
        1.1.2 流行情況及危害
        1.1.3 診斷方法及防控措施
    1.2 排泄分泌產物的概述
    1.3 排泄分泌產物在寄生蟲免疫功能中研究進展
    1.4 研究目的與意義
2 材料與方法
    2.1 大片形吸蟲的鑒定
        2.1.1 材料
        2.1.2 方法
    2.2 大片形吸蟲CaBp2基因的克隆、表達
        2.2.1 材料
        2.2.2 方法
    2.3 重組FgCaBp2及重組FgLAP蛋白免疫活性研究
        2.3.1 材料
        2.3.2 方法
    2.4 兩種蛋白對山羊外周血單個核細胞的作用
        2.4.1 材料
        2.4.2 方法
3 結果
    3.1 大片形吸蟲鑒定
        3.1.1 片形吸蟲蟲體形態(tài)學鑒定結果
        3.1.2 片形吸蟲分子生物學鑒定結果
    3.2 FgCaBp2基因的克隆表達結果
        3.2.1 FgCaBp2基因克隆結果
        3.2.2 FgCaBp2基因生物信息學分析結果
        3.2.3 重組克隆質粒pMD19-T-rFgCaBp2的鑒定
        3.2.4 重組表達質粒pET-30a-rFgCaBp2的鑒定
        3.2.5 目的蛋白的表達與分析
    3.3 重組FgCaBp2及重組Fg LAP蛋白的免疫活性
        3.3.1 兩種蛋白與人工感染山羊的陽性血清的Western-blot分析
        3.3.2 間接ELISA檢測兩種蛋白免疫家兔制備的多克隆抗體滴度與最佳稀釋度
        3.3.3 兩種蛋白與相應兔源多克隆抗體的Western-blot分析
    3.4 兩種蛋白對山羊外周血單個核細胞的作用
        3.4.1 兩種蛋白與山羊外周血單個核細胞的結合作用
        3.4.2 兩種蛋白對山羊PBMCs細胞因子分泌及總NO的產生的影響
        3.4.3 兩種蛋白對山羊PBMCs的增殖與遷移作用
        3.4.4 兩種蛋白對山羊PBMCs凋亡及山羊單核細胞吞噬功能的影響
4 討論
    4.1 大片形吸蟲的鑒定
    4.2 rFgCaBp2基因的克隆、表達與純化
    4.3 rFgCaBp2蛋白與rFgLAP蛋白的免疫活性
    4.4 兩種蛋白對山羊PBMCs功能的影響
        4.4.1 兩種蛋白與山羊外周血單個核細胞的體外結合
        4.4.2 兩種蛋白對山羊PBMCs細胞因子分泌的影響及總NO的產生
        4.4.3 兩種蛋白對山羊PBMCs的增殖與遷移作用
        4.4.4 兩種蛋白對山羊PBMCs的凋亡與山羊單核細胞吞噬功能的影響
5 結論
參考文獻
致謝
個人簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
[1]旋毛蟲ES抗原對小鼠腹腔巨噬細胞NOD1受體通路影響的研究[J]. 李曉云,韓彩霞,陰玥,胡靜,張妍,孟詩,孟小晴,宋銘忻.  中國預防獸醫(yī)學報. 2019(01)
[2]華支睪吸蟲鈣結合蛋白Cs16的重組表達及血清診斷應用的初步評價[J]. 濮玨彪,唐莉莉,殷岑楠,杜新月,吳健樺,趙蔚,劉登宇,王兆軍,吳琛耘.  中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志. 2018(03)
[3]捻轉血矛線蟲蘇氨酸醛縮酶結構域包含蛋白的克隆與表達及其體外對山羊外周血單個核細胞功能的影響[J]. 溫玉玲,王玉儉,吳玲燕,嚴若峰,徐立新,宋小凱,李祥瑞.  南京農業(yè)大學學報. 2017(03)
[4]片形吸蟲與片形吸蟲病(四)[J]. 張毅強.  廣西畜牧獸醫(yī). 2011(06)
[5]片形吸蟲與片形吸蟲病(一)[J]. 張毅強.  廣西畜牧獸醫(yī). 2011(03)

博士論文
[1]甘肅省牦牛肝片形吸蟲病血清學流行病學調查及不同發(fā)育期大片形吸蟲轉錄組和MicroRNA組研究[D]. 張曉軒.吉林農業(yè)大學 2017

碩士論文
[1]大片吸蟲兩種排泄分泌蛋白的克隆、表達及其對山羊外周血單個核細胞功能影響的研究[D]. 田艾靈.中國農業(yè)科學院 2018
[2]大片形吸蟲ES與宿主互作抗原的篩選、鑒定及分析[D]. 岳東梅.黑龍江八一農墾大學 2017
[3]云南大理市片形吸蟲的分子鑒定及部分線粒體DNA的序列研究[D]. 郭田田.昆明醫(yī)科大學 2016



本文編號：3475840