弓形蟲（Toxoplasma gondii, T. gondii）和新孢子蟲（Neospora caninium, N. caninum）都是專性細胞內寄生原蟲,同屬頂復亞門,二者在形態(tài)學特征和生物學特性上有許多相似之處,但是它們對小鼠的急性毒力卻存在顯著差異。許多研究已經表明弓形蟲棒狀體蛋白18（T. gondii rhoptry protein18, TgROP18）是其最重要的毒力因子,介導了弓形蟲Ⅰ型強毒株與Ⅲ型弱毒株的毒力差異。本研究通過生物信息學分析發(fā)現(xiàn)新孢子蟲棒狀體蛋白18（N. caninum rhoptry protein18, NcROP18）的基因序列中插入了多個終止密碼子,不能表達相應的功能蛋白,是一個假基因。因此,我們推測弓形蟲與新孢子蟲ROP18的差異可能是導致它們急性毒力差異的重要因素�；谏鲜鲈�,我們開展了如下研究。首先將弓形蟲Ⅰ型蟲株RH株的TgROP18定向克隆至pDMG表達載體,構建了以綠色熒光蛋白（GFP）為報告基因、乙胺嘧啶抗性基因CDHFR-TS)為篩選標記的pDMG-TgROP18-GFP轉染質粒。通過電轉化方法將質粒轉入新孢子蟲Nc1株... 

【文章來源】：中國農業(yè)大學北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
第一章 文獻綜述
    1.1 弓形蟲轉基因學研究進展
    1.2 新孢子蟲轉基因學研究進展
    1.3 弓形蟲毒力因子研究進展
    1.4 弓形蟲和新孢子蟲致病性差異的思考
第二章 表達TGROP18的轉基因新孢子蟲的構建
    2.1 引言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 材料
        2.2.2 方法
    2.3 結果與分析
        2.3.1 TgROP18與NcROP18基因序列比對分析
        2.3.2 重組質粒pDMG-TgROP18-GFP的構建
        2.3.3 轉基因新孢子蟲的構建及篩選
        2.3.4 轉基因新孢子蟲的鑒定
        2.3.5 TgROP18在轉基因新孢子蟲的定位分析
    2.4 討論
    2.5 小結
第三章 表達TGROP18的轉基因新孢子蟲的表型研究
    3.1 引言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 材料
        3.2.2 方法
    3.3 結果與分析
        3.3.1 轉基因新孢子蟲在細胞中的生長周期縮短
        3.3.2 轉基因新孢子蟲的表型發(fā)生改變
        3.3.3 轉基因新孢子蟲的運動能力未發(fā)生改變
        3.3.4 轉基因新孢子蟲的滑行運動能力未發(fā)生改變
        3.3.5 轉基因新孢子蟲入侵細胞的能力未發(fā)生改變
        3.3.6 轉基因新孢子蟲在細胞內的增殖能力增強
    3.4 討論
    3.5 小結
第四章 轉基因表達TGROP18對新孢子蟲毒力的影響
    4.1 引言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 材料
        4.2.2 方法
    4.3 結果與分析
        4.3.1 轉基因新孢子蟲對小鼠的毒力顯著增強
        4.3.2 轉基因表達的TgROP18阻止IRGs向轉基因新孢子蟲的PVM募集
        4.3.3 轉基因新孢子蟲可以磷酸化IRGs
        4.3.4 轉基因新孢子蟲中NcROP5可能發(fā)揮調控TgROP18的作用
    4.4 討論
    4.5 小結
第五章 結論與創(chuàng)新點
    5.1 結論
    5.2 創(chuàng)新點
參考文獻
致謝
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