中性粒細(xì)胞（Polymorphonuclear,PMN）作為機(jī)體抵抗外來病原體最重要的天然免疫成員,除了傳統(tǒng)的吞噬和脫顆粒的作用方式外,還能夠釋放由DNA、組蛋白H3、髓過氧化物酶（myeloperoxidase,MPO）和彈性蛋白酶（elastase）等組成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),即中性粒細(xì)胞胞外誘捕網(wǎng)（neutrophil extracellular traps,NETs）,NETs在機(jī)體內(nèi)發(fā)揮捕獲并消滅病原體的作用。而目前關(guān)于旋毛蟲逃避中性粒細(xì)胞捕獲及殺滅作用的機(jī)制還沒有系統(tǒng)的報(bào)道。旋毛蟲病是一種由旋毛蟲（Trichinella spiralis）感染引起的嚴(yán)重危害人類健康的人獸共患寄生蟲病。目前的研究已證實(shí),旋毛蟲排泄分泌物（Excretion/Secretion,ES）具有核酸酶（DNase）活性,可降解胞外誘捕網(wǎng)以逃避捕獲。而本實(shí)驗(yàn)是在加入核酸酶抑制劑（Aurintricarboxylic acid,ATA）阻斷DNase活性的條件下,探究旋毛蟲成蟲ES對中性粒細(xì)胞胞外誘捕網(wǎng)形成、活性氧物質(zhì)（ROS）生成和細(xì)胞因子產(chǎn)生的影響。首先,提取小鼠骨髓中性粒細(xì)胞（Murine bone mar... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮寫表
前言
第一篇 文獻(xiàn)綜述
    第一章 中性粒細(xì)胞功能的研究進(jìn)展
        1 中性粒細(xì)胞的免疫應(yīng)答
            1.1 趨化作用
            1.2 吞噬調(diào)理
            1.3 中性粒細(xì)胞胞漿內(nèi)顆粒的雙重作用
        2 中性粒細(xì)胞胞外誘捕網(wǎng)(NETs)
            2.1 NETs的形成機(jī)制
            2.2 NETs與寄生蟲
        3 病原體逃避中性粒細(xì)胞的免疫應(yīng)答
            3.1 抑制吞噬殺傷
            3.2 NETs
            3.3 凋亡
        4 小結(jié)
    第二章 寄生蟲排泄分泌物的研究進(jìn)展
        1 排泄分泌物的來源
        2 排泄分泌物的功能
            2.1 參與免疫逃避
            2.2 免疫調(diào)節(jié)作用
        3 排泄分泌物的應(yīng)用
            3.1 診斷
            3.2 疫苗研發(fā)
            3.3 治療免疫性疾病
        4 小結(jié)
第二篇 研究內(nèi)容
    第一章 中性粒細(xì)胞的分離與鑒定
        1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 主要儀器
            1.2 主要試劑與耗材
            1.3 主要實(shí)驗(yàn)動物與細(xì)胞
            1.4 主要試劑的配制
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 小鼠骨髓中性粒細(xì)胞的分離
            2.2 中性粒細(xì)胞純度檢測
            2.3 NETs免疫熒光檢測
            2.4 中性粒細(xì)胞胞外DNA定量分析
        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1 小鼠骨髓中性粒細(xì)胞的分離
            3.2 PMA誘導(dǎo)NETs形成
            3.3 確定PMA誘導(dǎo)NETs形成的最佳時間和濃度
        4 討論
        5 小結(jié)
    第二章 旋毛蟲成蟲排泄分泌物抑制NETS釋放
        1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 主要儀器
            1.2 主要試劑
            1.3 實(shí)驗(yàn)動物、細(xì)胞和蟲株
            1.4 主要試劑的配置
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 旋毛蟲肌幼蟲(ML)的收集
            2.2 旋毛蟲成蟲(Ad3)的收集
            2.3 Ad3 ES的收集
            2.4 Ad3 ES SDS-PAGE分析
            2.5 cck-8法檢測Ad3 ES對PMN的毒性
            2.6 不同濃度的Ad3 ES抑制PMA誘導(dǎo)NETs的釋放
            2.7 LDH檢測
            2.8 ROS檢測
        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1 Ad3 ES抗原SDS-PAGE的測定結(jié)果
            3.2 CCK-8檢測Ad3 ES對PMN的毒性
            3.3 Ad3 ES抑制NETs的形成
            3.4 LDH檢測
            3.5 ROS檢測
        4 討論
        5 小結(jié)
    第三章 AD3 ES對中性粒細(xì)胞吞噬功能及分泌細(xì)胞因子的影響
        1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 主要儀器
            1.2 主要試劑
            1.3 主要質(zhì)粒、菌株
            1.4 實(shí)驗(yàn)動物、細(xì)胞
            1.5 主要試劑的配制
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 構(gòu)建及鑒定增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(eGFP)標(biāo)記的大腸桿AAAa菌
            2.2 PMN吞噬效率的測定
            2.3 qRT-PCR
            2.4 ELISA法檢測Ad3 ES對PMN釋放細(xì)胞因子的影響
        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1 重組質(zhì)粒的酶切鑒定
            3.2 熒光顯微鏡觀察增強(qiáng)型綠色熒光標(biāo)記的大腸桿菌
            3.3 ES對 PMN吞噬能力的影響
            3.4 qRT-PCR檢測Ad3 ES對中性粒細(xì)胞細(xì)胞因子表達(dá)的影響
            3.5 ELISA檢測旋毛蟲ES對中性粒細(xì)胞細(xì)胞因子表達(dá)的影響
        4 討論
        5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
導(dǎo)師簡介
作者簡介
在學(xué)期間成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]淺析寄生蟲的免疫逃避[J]. 方金亮.  中國畜禽種業(yè). 2015(11)
[2]細(xì)胞因子白介素-6和白介素-10對中性粒細(xì)胞凋亡的影響[J]. 張銀中,葉鐵虎,趙麗云,任洪智,黃宇光.  武警醫(yī)學(xué). 2004(09)

博士論文
[1]旋毛蟲不同發(fā)育期抗原基因克隆及其對豬的保護(hù)作用研究[D]. 徐靜.吉林大學(xué) 2017



本文編號：3465479