豬傳染性胃腸炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus,TGEV）、豬流行性腹瀉病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）、豬血凝性腦脊髓炎病毒（Porcine hemmagglutinatipg encephalomyelitis virus,PHEV）及豬丁型冠狀病毒（Porcine deltacoronavirus,PDCoV）均屬于冠狀病毒科冠狀病毒屬,在臨床上都可引起仔豬的水樣腹瀉和嘔吐等癥狀,且致死率較高,給養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。越來越多的研究表明,這四種病毒在臨床上常呈混合感染,為疾病的鑒別診斷帶來巨大的挑戰(zhàn)。目前,對(duì)上述病毒建立的檢測(cè)方法多數(shù)是針對(duì)單一病毒,聯(lián)合檢測(cè)方法較少。考慮到四種病毒都是從形態(tài)學(xué)上無法區(qū)分的冠狀病毒,而且感染仔豬的臨床特征有一定的相似性,因此本研究從鑒別診斷方法入手,建立了可同時(shí)檢測(cè)和區(qū)分四種仔豬易感冠狀病毒的多重RT-PCR檢測(cè)方法,并初步用于臨床樣本檢測(cè),對(duì)于該類病原感染的早期疫情診斷和流行病學(xué)調(diào)查具有重要意義。研究取得如下結(jié)果:根據(jù)GenBank上發(fā)表的四種冠狀病毒... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
符號(hào)及縮略語(yǔ)說明
引言
第一篇 文獻(xiàn)綜述
    1 豬傳染性胃腸炎病毒的概述
        1.1 豬傳染性胃腸炎及豬傳染性胃腸炎病毒的研究進(jìn)展
        1.2 豬傳染性胃腸炎病毒檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展
    2 豬流行性腹瀉病毒概述
        2.1 豬流行性腹瀉及豬流行性腹瀉病毒的研究進(jìn)展
        2.2 豬流行性腹瀉病毒檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展
    3 豬血凝性腦脊髓炎病毒研究進(jìn)展
        3.1 豬血凝性腦脊髓炎及豬血凝性腦脊髓炎病毒的研究進(jìn)展
        3.2 豬血凝性腦脊髓炎病毒檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展
    4 豬丁型冠狀病毒研究進(jìn)展
        4.1 豬丁型冠狀病毒病及豬丁型冠狀病毒病毒的研究進(jìn)展
        4.2 豬丁型冠狀病毒病毒檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展
第二篇 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
    第一章 四種冠狀病毒單一RT-PCR檢測(cè)方法的初步建立
        1.1 材料
            1.1.1 病毒和毒株
            1.1.2 主要試劑
            1.1.3 主要儀器
        1.2 方法
            1.2.1 引物的設(shè)計(jì)與合成
            1.2.2 樣品及模板制備
            1.2.3 單一RT-PCR反應(yīng)
            1.2.4 RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的純化和回收
            1.2.5 連接和轉(zhuǎn)化
            1.2.6 陽(yáng)性重組質(zhì)粒的鑒定及PCR鑒定
            1.2.7 單一RT-PCR反應(yīng)的靈敏性實(shí)驗(yàn)
            1.2.8 單一RT-PCR反應(yīng)的特異性實(shí)驗(yàn)
        1.3 結(jié)果
            1.3.1 單一RT-PCR退火溫度確定
            1.3.2 單一RT-PCR方法中引物濃度確定
            1.3.3 單一RT-PCR反應(yīng)的靈敏性實(shí)驗(yàn)
            1.3.4 單一RT-PCR反應(yīng)的特異性實(shí)驗(yàn)
        1.4 討論
        1.5 小結(jié)
    第二章 豬四種冠狀病毒的多重RT-PCR檢測(cè)方法的建立及初步應(yīng)用
        2.1 材料
            2.1.1 菌株及毒株
            2.1.2 待檢臨床樣品
            2.1.3 主要試劑
        2.2 方法
            2.2.1 二重RT-PCR方法的退火溫度的優(yōu)化
            2.2.2 三重RT-PCR方法的擴(kuò)增及退火溫度的優(yōu)化
            2.2.3 四種病毒的四重RT-PCR檢測(cè)方法的建立及初步應(yīng)用
        2.3 結(jié)果
            2.3.1 二重RT-PCR方法的退火溫度的優(yōu)化
            2.3.2 三重RT-PCR方法的退火溫度的優(yōu)化
            2.3.3 四重RT-PCR檢測(cè)方法的建立及初步應(yīng)用
        2.4 討論
        2.5 小結(jié)
第三篇 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
導(dǎo)師簡(jiǎn)介
個(gè)人簡(jiǎn)介
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬傳染性胃腸炎病毒間接免疫熒光檢測(cè)方法的建立[J]. 朱蘊(yùn)暖,張?chǎng)?朱向東,陳建飛,時(shí)洪艷,石達(dá),王鑫,季朝陽(yáng),馮力.  中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2017(01)
[2]同時(shí)檢測(cè)PEDV和TGEV及PDCoV的多重RT-PCR方法的建立及初步應(yīng)用[J]. 任玉鵬,張斌,湯承,曹恭貌,岳華.  中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2016(06)
[3]豬德爾塔冠狀病毒感染的防控[J]. 萬遂如.  養(yǎng)豬. 2016(02)
[4]新現(xiàn)豬Delta冠狀病毒RT-PCR檢測(cè)方法的建立及其應(yīng)用[J]. 張帆帆,宋德平,周信榮,黃冬艷,李安琪,彭棋,陳燕君,吳瓊,何后軍,唐玉新.  中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué). 2016(07)
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[10]豬傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒和豬博卡病毒多重PCR檢測(cè)方法的建立[J]. 焦洋,姜焱,王凱民,張常印,雷治海,唐泰山.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2013(08)

碩士論文
[1]豬血凝性腦脊髓炎病毒雙抗夾心ELISA抗原檢測(cè)試劑盒的研制與應(yīng)用[D]. 尹洋.吉林大學(xué) 2017
[2]一起豬血凝性腦脊髓炎的診斷[D]. 張?jiān)孪?吉林大學(xué) 2016
[3]內(nèi)蒙古豬傳染性胃腸炎流行病學(xué)調(diào)查及豬傳染性胃腸炎病毒S基因序列分析[D]. 李靜.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[4]豬流行性腹瀉病毒的流行病學(xué)調(diào)查及快速檢測(cè)方法的初步建立[D]. 趙振鵬.揚(yáng)州大學(xué) 2016
[5]豬傳染性胃腸炎病毒LJ-12株的分離及鑒定[D]. 姜春霞.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[6]豬傳染性胃腸炎病毒M基因的克隆、表達(dá)及ELISA抗體檢測(cè)方法的建立[D]. 張小波.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010



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