試驗旨在探究ORFV在強弱毒株與駱駝之間其免疫相關基因所表現出的差異變化。通過對采集到的青島某發(fā)病羊場病料（強毒）,在山羊成纖維細胞上連續(xù)傳90代毒株以及從阿拉善某發(fā)病雙峰駝采集到的病料分別進行病毒基因組提取,并對提取到的基因組分別命名為ORFV/QD/Y、ORFV/RD/Y、ORFV/QD/LT。根據GenBank上發(fā)表的羊口瘡全基因組序列設計并合成3對特異性引物,分別擴增 ORFV/QD/Y、ORFV/RD/Y和 ORFV/QD/LT 的 B2L 基因、F1L 基因和 VIR基因片段,并將擴增得到的基因組片段分別克隆到PMD-19T載體上,轉化到DH5α感受態(tài)細胞中,對重組質粒進行鑒定后送至測序公司進行測序,用DNA Star軟件對測序結果進行拼接及三組基因組之間核苷酸同源性比較分析,再將測序結果與NCBI上已公布的13組ORFV全基因組相應基因核苷酸序列進行同源性比對分析、構建系統(tǒng)進化樹及氨基酸序列比對分析。結果表明,三組基因組之間B2L基因、F1L基因和VIR基因核苷酸同源性分別為84.2%～96.6%、88.0%～98.3%和77.4%～95.7%,三組基因組與參考序列的B2... 

【文章來源】：內蒙古農業(yè)大學內蒙古自治區(qū)

【文章頁數】：46 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１羊口瘡病毒粒子電鏡照片（ｘｌＯＯｎｍ；?ｘ５００ｎｍ）（引遲雪林等＞??Ｆｉｇ．】Ｅｌｅｃｔｒｏｎ?ｍｉｃｒｏｐｈｏｔｏｇｒａｐｈ?ｏｆ?ａｎ?ｏｒｆ?ｖｉｒｏｎ．（ｂａｉ－＝ｌ?００ｎｍ；５００ｎｍ）??

?內蒙古農業(yè)大學碩士學位論文?３??Ｃ＋Ｇ堿基對［２３＿２４］�；蚪M中間為中心編碼區(qū)（ＯＲＦ００９？０ＲＦ１１１），兩端為反向末端重??復序列（ＯＲＦ００１？ＯＲＦ００８和０ＲＦ１１２？ＯＲＦ１３４），如圖２所示。其中心編碼區(qū)表??現為高度保守，正是因為這種構造為病毒復制和形態(tài)構成創(chuàng)造了條件。而其基因組兩??端的末端區(qū)域則是與毒力基因相關的致病因素［２５］。研宄顯示，ＯＲＦＶ的中心編碼區(qū)與??正痘病毒屬中的牛痘病毒十分相似，但由于末端序列出現了基因的插入、缺失和異位??等突變現象使得ＯＲＦＶ與牛疸病毒顯示出高度的差異性，也導致了同一種屬的病毒??在物種之間與不同屬之間產生變異［２６］。通過對己公布的ＯＲＦＶ基因組全序列進行分??析可發(fā)現不同ＯＲＦＶ毒株之間同源性相對較高，這表明ＯＲＦＶ相對保守。但是，由??于ＯＲＦＶ的毒力基因和免疫相關基因都集中在基因組兩端，由于ＯＲＦＶ基因組兩端??常出現變異，在基因重組的過程中通過獲得宿主基因或缺少非必須基因而產生新毒株??［２７］。據報道，ＯＲＦＶ通過細胞多次傳代后，由于末端基因的缺失或重組可導致病毒致??病力降低，因為這些變異區(qū)域為非必須基因，可以被其他外源基因所替換，而許多新??疫苗的開發(fā)也正是利用了這一點Ｍ。??Ｉ?一?Ｉ??ＩＴＲ?Ｊ＜?編碼區(qū)?＞１?ＩＴＲ??Ｚ丨?—?＼??＾????????、??〇ｆｉ＾ｓ??Ｔ＊ｎｕｉｎ￡ｌ?ｙｔｍｓｔｉｏｎ?ｒｅｅｔｏｎ?Ｃｅｉａｔｉｓｌ?ｃｏｎ?ｓｅｉｚｅｄ?ｒｅｇｉｏｎ?Ｔｅｍｉｉｕｓｌ?ｒｅｅｉｏｎ??圖２羊口瘡病毒的基因組結構示意圖（引閆豐超等，２０１３）??Ｆｉｇ．２?Ｉ?ｈｅ?ｓ

１４?不同宿主來源的ＯＲＦＶ免疫相關基因的比較分析???３結果??３．１強毒株、９０代毒株與駱駝ＯＲＦＶ免疫相關基因的擴增結果??用設計好的特異性引物（見表２?）分別對ＯＲＦＶ／ＱＤ／Ｙ、ＯＲＦＶ／ＲＤ／Ｙ和??ＯＲＦＶ／ＱＤ／ＬＴ的Ｂ２Ｌ基因、Ｆ１Ｌ基因和ＶＩＲ基因進行ＰＣＲ擴增，分別擴增出單一清??晰條帶，且片段大小與預期一致，如圖３？圖５。??Ｍ?１?２?３?４?５?Ｍ?１?２?３?４?５?Ｍ?１?２?３?４?５??２ＧＣ３Ｌ－Ｍ＇＇?＇?７５：：ｂｐＥｆｃ?＾?２０：：ｂｐＫ?，?．＂＾１??：ｒ：＇：：?：：，：．．：?…１．ｉ：：＇：?－：；ｉ??，ＨＢ?■卿■??圖３?Ｂ２Ｌ基因ＰＣＲ擴增結果?圖４?Ｆ１Ｌ基因ＰＣＲ擴增結果?圖５?ＶＩＲ基因ＰＣＲ擴增結果??Ｍ：ＤＬ５０００ＤＭＡＭａｒｋｅｒ；?１?？５：?Ｍ：ＤＬ２０００?ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；?１?？５：?Ｍ：ＤＬ５０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；?１?？５：??ＰＣＲ產物；４：陰性對照；５：陽?ＰＣＲ產物；４：陰性對照；５：陽?ＰＣＲ產物；４：陰性對照；５：陽??性對照?性對照?性對照??Ｆｉｇ．３?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｂ２Ｌ?ｇｅｎｅ?Ｆｉｇ．４?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｆ１Ｌ?ｇｅｎｅ?Ｆｉｇ－５?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＶＩＲ?ｇｅｎｅ??ＰＣＲ?ＰＣＲ?ＰＣＲ??Ｍ：?ＤＬ５０００?ＤＮＡＭａｉ．ｋｅｒ：?１?？５：?Ｍ：?ＤＬ２０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ：?１?？５：?Ｍ：?ＤＬ５０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ：?１?？５：??ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?；?４?：?Ｎｅｇａｔｉｖｅ?ＰＣＲ

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[2]羊口瘡病毒文登株和石林株毒力致弱及毒力相關基因的生物信息學分析[D]. 周銘.西北農林科技大學 2016
[3]鑒別診斷山羊痘、綿羊痘、羊口瘡和小反芻獸疫多重PCR檢測方法的建立[D]. 李琛.內蒙古農業(yè)大學 2015
[4]不同地區(qū)羊口瘡病毒三個主要結構蛋白基因的遺傳進化分析[D]. 李浩.內蒙古農業(yè)大學 2015
[5]羊口瘡病毒的分離鑒定及B2L囊膜蛋白單克隆抗體的制備[D]. 譚強.黑龍江八一農墾大學 2014
[6]富平某奶山羊養(yǎng)殖場羊口瘡分子病原學調查及滅活疫苗免疫效果評估[D]. 賈云曉.西北農林科技大學 2014
[7]羊口瘡病原分子流行病學調查及蜂膠佐劑滅活疫苗免疫效果研究[D]. 張立強.西北農林科技大學 2014
[8]羊口瘡抗體ELISA檢測方法的建立及應用[D]. 李杰.西北農林科技大學 2013
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本文編號：3463379