口蹄疫O型病毒3A和3B基因?qū)Σ《舅拗魇刃缘挠绊?/H1>
發(fā)布時間：2021-10-28 14:21
口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus,FMDV）非結構蛋白3A基因的突變（點突變或缺失）和3B基因的拷貝數(shù)與病毒的宿主嗜性有關,但FMDV宿主偏嗜性的分子機制目前還不明了。本研究選取口蹄疫Mya-98譜系牛源分離株O/GZSB/2011和豬源分離株O/GD/2/CHN/2010,進行了全基因組測序和全長感染性cDNA克隆的構建,并在此基礎上構建了3A缺失突變體（rvSBA93-102、rvSBΔ133-143、rvGDA93-102和rvGDA133-143）3A嵌合病毒（rvSB70、rvOZ70和rvSBqO）、3A標記病毒（rvSBm、rvSBh和vSBf）和3B突變體病毒（rvB1323、rv2B3、rvB13和rv1B3）,分析了這些重組病毒在不同宿主細胞上的生物學特性,結果表明：1、4株3A缺失突變體在BHK-21、PK-15和胎豬腎原代細胞（FPK）上具有與親本毒株相似的蝕斑表型和生長動力學；在胎牛腎原代細胞（FBK）上,rvSBA133-143和rvGDA133-143具有與其親本毒株相似的蝕斑表型和生長動力學,而rvSBA93-102和...
【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學院北京市
【文章頁數(shù)】：130 頁
【學位級別】：博士
【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表
第一章 引言
1.1 口蹄疫病毒
1.2 FMD的歷史與分布
1.3 FMD在我國的流行現(xiàn)狀
1.3.1 A型
1.3.2 Asia 1型
1.3.3 O型
1.4 FMDV基因組結構及其功能
1.4.1 FMDV非編碼區(qū)的功能
1.4.2 FMDV結構蛋白的功能
1.4.3 FMDV非結構蛋白的功能
1.5 反向遺傳學技術及其在RNA病毒中的應用
1.5.1 反向遺傳學技術
1.5.2 反向遺傳學技術在RNA病毒中的應用
1.5.3 RNA病毒反向遺傳學技術的不足
1.6 3A與FMDV的宿主嗜性
1.7 研究內(nèi)容和方法
第二章 兩株不同來源的口蹄疫病毒的全基因組序列測定及其基因特征分析
2.1 材料
2.1.1 病毒樣品
2.1.2 FMDV參考毒株
2.1.3 主要試劑
2.1.4 儀器設備
2.1.5 引物的設計與合成
2.2 方法
2.2.1 病毒RNA的提取
2.2.2 反轉錄
2.2.3 FMDV基因組全長擴增
2.2.4 PCR產(chǎn)物的純化回收及序列測定
2.2.5 序列分析
2.3 結果
2.3.1 RT-PCR
2.3.2 全基因組序列分析
2.3.3 序列比對分析
2.3.4 系統(tǒng)發(fā)生樹分析
2.4 討論
第三章 兩株口蹄疫病毒全長感染性cDNA克隆的構建
3.1 材料
3.1.1 病毒、質(zhì)粒、細胞
3.1.2 試劑
3.1.3 實驗動物
3.1.4 儀器設備
3.2 方法
3.2.1 引物設計
3.2.2 全長cDNA克隆的構建
3.2.3 分子標簽的引入
3.2.4 轉染
3.2.5 重組病毒的RT-PCR鑒定及穩(wěn)定性分析
3.2.6 間接免疫熒光檢測
3.2.7 生長曲線分析
3.2.8 蝕斑形態(tài)分析
3.2.9 乳鼠毒價的測定
3.3 結果
3.3.1 FMDV全基因組序列的RT-PCR擴增
3.3.2 融合PCR擴增
3.3.3 重組質(zhì)粒的酶切鑒定
3.3.4 分子標簽的引入
3.3.5 重組質(zhì)粒的序列測定
3.3.6 重組病毒的拯救
3.3.7 重組病毒的RT-PCR檢測
3.3.8 重組病毒的遺傳穩(wěn)定性分析
3.3.9 間接免疫熒光檢測
3.3.10 生長曲線分析
3.3.11 蝕斑表型分析
3.3.12 乳鼠致病力分析
3.4 討論
第四章 FMDV 3A缺失突變體的構建及其生物學特性研究
4.1 材料
4.1.1 細胞和質(zhì)粒
4.1.2 試劑
4.1.3 儀器設備
4.2 方法
4.2.1 引物設計
4.2.2 PCR擴增
4.2.3 PCR產(chǎn)物的純化
4.2.4 融合PCR
4.2.5 含3A缺失的FMDV全長cDNA的構建
4.2.6 轉染
4.2.7 3A缺失突變體的RT-PCR鑒定及穩(wěn)定性分析
4.2.8 間接免疫熒光檢測
4.2.9 生長曲線分析
4.2.10 3A缺失突變體在不同細胞上的復制能力和蝕斑表型分析
4.2.11 熒光定量RT-PCR
4.2.12 乳鼠致病性試驗
4.3 結果
4.3.1 PCR擴增結果
4.3.2 融合PCR擴增
4.3.3 含3A缺失的FMDV全長cDNA的鑒定
4.3.4 3A缺失病毒的拯救
4.3.5 3A缺失病毒的RT-PCR檢測
4.3.6 3A缺失病毒的遺傳穩(wěn)定性分析
4.3.7 間接免疫熒光檢測
4.3.8 生長曲線分析
4.3.9 蝕斑表型分析
4.3.10 熒光定量RT-PCR分析
4.4 討論
第五章 嵌合FMDV的構建及其生物學特征
5.1 材料
5.1.1 細胞和質(zhì)粒
5.1.2 試劑
5.1.3 儀器設備
5.2 方法
5.2.1 引物設計
5.2.2 PCR擴增
5.2.3 PCR產(chǎn)物的純化
5.2.4 融合PCR
5.2.5 嵌合FMDV全長cDNA的構建
5.2.6 轉染
5.2.7 嵌合的RT-PCR鑒定及穩(wěn)定性分析
5.2.8 間接免疫熒光檢測
5.2.9 生長曲線分析
5.2.10 嵌合在不同細胞上的復制能力和蝕斑表型分析
5.2.11 熒光定量RT-PCR
5.3 結果
5.3.1 PCR擴增結果
5.3.2 融合PCR擴增
5.3.3 嵌合FMDV全長cDNA的鑒定
5.3.4 嵌合病毒的拯救
5.3.5 嵌合病毒的RT-PCR檢測
5.3.6 嵌合病毒的遺傳穩(wěn)定性分析
5.3.7 間接免疫熒光檢測
5.3.8 生長曲線分析
5.3.9 蝕斑表型分析
5.3.10 熒光定量RT-PCR分析
5.4 討論
第六章 3A標記的FMDV的構建及其生物學特性分析
6.1 材料
6.1.1 細胞和質(zhì)粒
6.1.2 試劑
6.1.3 儀器設備
6.2 方法
6.2.1 引物設計
6.2.2 PCR擴增
6.2.3 PCR產(chǎn)物的純化
6.2.4 融合PCR
6.2.5 3A標記的FMDV全長cDNA的構建
6.2.6 轉染
6.2.7 3A標記病毒的RT-PCR鑒定及穩(wěn)定性分析
6.2.8 間接免疫熒光檢測
6.2.9 Western blot檢測
6.2.10 生長曲線分析
6.2.11 3A標記病毒在不同細胞上的復制能力和蝕斑表型分析
6.3 結果
6.3.1 PCR擴增結果
6.3.2 融合PCR擴增
6.3.3 3A標記的FMDV全長cDNA的鑒定
6.3.4 3A標記病毒的拯救
6.3.5 3A標記病毒的RT-PCR檢測
6.3.6 3A缺失病毒的遺傳穩(wěn)定性分析
6.3.7 間接免疫熒光檢測
6.3.8 Western blot分析
6.3.9 生長曲線分析
6.3.10 蝕斑表型分析
6.4 討論
第七章 FMDV 3B突變株的構建及其生物學特性分析
7.1 材料
7.1.1 細胞和質(zhì)粒
7.1.2試劑
7.1.3 儀器設備
7.2 方法
7.2.1 引物設計
7.2.2 PCR擴增
7.2.3 PCR產(chǎn)物的純化
7.2.4 融合PCR
7.2.5 PCR擴增
7.2.6 融合PCR
7.2.7 3B突變體FMDV全長cDNA的構建
7.2.8 轉染
7.2.9 3B突變體病毒的RT-PCR鑒定及穩(wěn)定性分析
7.2.10 間接免疫熒光檢測
7.2.11 Western blot檢測
7.2.12 生長曲線分析
7.2.13 3B突變體病毒在不同細胞上的復制能力和蝕斑表型分析
7.3 結果
7.3.1 PCR擴增結果
7.3.2 融合PCR擴增
7.3.3 3B突變體FMDV全長cDNA的鑒定
7.3.4 3B突變體病毒的拯救
7.3.5 3B突變體病毒的RT-PCR檢測
7.3.6 3B突變體病毒的遺傳穩(wěn)定性分析
7.3.7 間接免疫熒光檢測
7.3.8 Western blot分析
7.3.9 生長曲線分析
7.3.10 蝕斑表型分析
7.4 討論
第八章 全文結論
參考文獻
附錄
致謝
作者簡介
【參考文獻】：
期刊論文
[1]RDD基序?qū)谔阋逜sia1型毒株感染力的影響[J]. 鄭海學,郭建宏,靳野,尚佑軍,田宏,楊亞民,劉湘濤,才學鵬. 科學通報. 2010(14)
[2]牛Asia 1型口蹄疫病毒感染性克隆的構建[J]. 李爽,張潤祥,宋鴿,高明春,劉湘濤,王君偉. 生物工程學報. 2009(11)
[3]RNA病毒作為疫苗載體的研究與應用[J]. 胡偉,段海清,陳惠鵬. 生物技術通訊. 2007(03)
本文編號：3462933
本文鏈接：http://www.sikaile.net/yixuelunwen/dongwuyixue/3462933.html
【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學院北京市
【文章頁數(shù)】：130 頁
【學位級別】：博士
【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表
第一章 引言
1.1 口蹄疫病毒
1.2 FMD的歷史與分布
1.3 FMD在我國的流行現(xiàn)狀
1.3.1 A型
1.3.2 Asia 1型
1.3.3 O型
1.4 FMDV基因組結構及其功能
1.4.1 FMDV非編碼區(qū)的功能
1.4.2 FMDV結構蛋白的功能
1.4.3 FMDV非結構蛋白的功能
1.5 反向遺傳學技術及其在RNA病毒中的應用
1.5.1 反向遺傳學技術
1.5.2 反向遺傳學技術在RNA病毒中的應用
1.5.3 RNA病毒反向遺傳學技術的不足
1.6 3A與FMDV的宿主嗜性
1.7 研究內(nèi)容和方法
第二章 兩株不同來源的口蹄疫病毒的全基因組序列測定及其基因特征分析
2.1 材料
2.1.1 病毒樣品
2.1.2 FMDV參考毒株
2.1.3 主要試劑
2.1.4 儀器設備
2.1.5 引物的設計與合成
2.2 方法
2.2.1 病毒RNA的提取
2.2.2 反轉錄
2.2.3 FMDV基因組全長擴增
2.2.4 PCR產(chǎn)物的純化回收及序列測定
2.2.5 序列分析
2.3 結果
2.3.1 RT-PCR
2.3.2 全基因組序列分析
2.3.3 序列比對分析
2.3.4 系統(tǒng)發(fā)生樹分析
2.4 討論
第三章 兩株口蹄疫病毒全長感染性cDNA克隆的構建
3.1 材料
3.1.1 病毒、質(zhì)粒、細胞
3.1.2 試劑
3.1.3 實驗動物
3.1.4 儀器設備
3.2 方法
3.2.1 引物設計
3.2.2 全長cDNA克隆的構建
3.2.3 分子標簽的引入
3.2.4 轉染
3.2.5 重組病毒的RT-PCR鑒定及穩(wěn)定性分析
3.2.6 間接免疫熒光檢測
3.2.7 生長曲線分析
3.2.8 蝕斑形態(tài)分析
3.2.9 乳鼠毒價的測定
3.3 結果
3.3.1 FMDV全基因組序列的RT-PCR擴增
3.3.2 融合PCR擴增
3.3.3 重組質(zhì)粒的酶切鑒定
3.3.4 分子標簽的引入
3.3.5 重組質(zhì)粒的序列測定
3.3.6 重組病毒的拯救
3.3.7 重組病毒的RT-PCR檢測
3.3.8 重組病毒的遺傳穩(wěn)定性分析
3.3.9 間接免疫熒光檢測
3.3.10 生長曲線分析
3.3.11 蝕斑表型分析
3.3.12 乳鼠致病力分析
3.4 討論
第四章 FMDV 3A缺失突變體的構建及其生物學特性研究
4.1 材料
4.1.1 細胞和質(zhì)粒
4.1.2 試劑
4.1.3 儀器設備
4.2 方法
4.2.1 引物設計
4.2.2 PCR擴增
4.2.3 PCR產(chǎn)物的純化
4.2.4 融合PCR
4.2.5 含3A缺失的FMDV全長cDNA的構建
4.2.6 轉染
4.2.7 3A缺失突變體的RT-PCR鑒定及穩(wěn)定性分析
4.2.8 間接免疫熒光檢測
4.2.9 生長曲線分析
4.2.10 3A缺失突變體在不同細胞上的復制能力和蝕斑表型分析
4.2.11 熒光定量RT-PCR
4.2.12 乳鼠致病性試驗
4.3 結果
4.3.1 PCR擴增結果
4.3.2 融合PCR擴增
4.3.3 含3A缺失的FMDV全長cDNA的鑒定
4.3.4 3A缺失病毒的拯救
4.3.5 3A缺失病毒的RT-PCR檢測
4.3.6 3A缺失病毒的遺傳穩(wěn)定性分析
4.3.7 間接免疫熒光檢測
4.3.8 生長曲線分析
4.3.9 蝕斑表型分析
4.3.10 熒光定量RT-PCR分析
4.4 討論
第五章 嵌合FMDV的構建及其生物學特征
5.1 材料
5.1.1 細胞和質(zhì)粒
5.1.2 試劑
5.1.3 儀器設備
5.2 方法
5.2.1 引物設計
5.2.2 PCR擴增
5.2.3 PCR產(chǎn)物的純化
5.2.4 融合PCR
5.2.5 嵌合FMDV全長cDNA的構建
5.2.6 轉染
5.2.7 嵌合的RT-PCR鑒定及穩(wěn)定性分析
5.2.8 間接免疫熒光檢測
5.2.9 生長曲線分析
5.2.10 嵌合在不同細胞上的復制能力和蝕斑表型分析
5.2.11 熒光定量RT-PCR
5.3 結果
5.3.1 PCR擴增結果
5.3.2 融合PCR擴增
5.3.3 嵌合FMDV全長cDNA的鑒定
5.3.4 嵌合病毒的拯救
5.3.5 嵌合病毒的RT-PCR檢測
5.3.6 嵌合病毒的遺傳穩(wěn)定性分析
5.3.7 間接免疫熒光檢測
5.3.8 生長曲線分析
5.3.9 蝕斑表型分析
5.3.10 熒光定量RT-PCR分析
5.4 討論
第六章 3A標記的FMDV的構建及其生物學特性分析
6.1 材料
6.1.1 細胞和質(zhì)粒
6.1.2 試劑
6.1.3 儀器設備
6.2 方法
6.2.1 引物設計
6.2.2 PCR擴增
6.2.3 PCR產(chǎn)物的純化
6.2.4 融合PCR
6.2.5 3A標記的FMDV全長cDNA的構建
6.2.6 轉染
6.2.7 3A標記病毒的RT-PCR鑒定及穩(wěn)定性分析
6.2.8 間接免疫熒光檢測
6.2.9 Western blot檢測
6.2.10 生長曲線分析
6.2.11 3A標記病毒在不同細胞上的復制能力和蝕斑表型分析
6.3 結果
6.3.1 PCR擴增結果
6.3.2 融合PCR擴增
6.3.3 3A標記的FMDV全長cDNA的鑒定
6.3.4 3A標記病毒的拯救
6.3.5 3A標記病毒的RT-PCR檢測
6.3.6 3A缺失病毒的遺傳穩(wěn)定性分析
6.3.7 間接免疫熒光檢測
6.3.8 Western blot分析
6.3.9 生長曲線分析
6.3.10 蝕斑表型分析
6.4 討論
第七章 FMDV 3B突變株的構建及其生物學特性分析
7.1 材料
7.1.1 細胞和質(zhì)粒
7.1.2試劑
7.1.3 儀器設備
7.2 方法
7.2.1 引物設計
7.2.2 PCR擴增
7.2.3 PCR產(chǎn)物的純化
7.2.4 融合PCR
7.2.5 PCR擴增
7.2.6 融合PCR
7.2.7 3B突變體FMDV全長cDNA的構建
7.2.8 轉染
7.2.9 3B突變體病毒的RT-PCR鑒定及穩(wěn)定性分析
7.2.10 間接免疫熒光檢測
7.2.11 Western blot檢測
7.2.12 生長曲線分析
7.2.13 3B突變體病毒在不同細胞上的復制能力和蝕斑表型分析
7.3 結果
7.3.1 PCR擴增結果
7.3.2 融合PCR擴增
7.3.3 3B突變體FMDV全長cDNA的鑒定
7.3.4 3B突變體病毒的拯救
7.3.5 3B突變體病毒的RT-PCR檢測
7.3.6 3B突變體病毒的遺傳穩(wěn)定性分析
7.3.7 間接免疫熒光檢測
7.3.8 Western blot分析
7.3.9 生長曲線分析
7.3.10 蝕斑表型分析
7.4 討論
第八章 全文結論
參考文獻
附錄
致謝
作者簡介
【參考文獻】：
期刊論文
[1]RDD基序?qū)谔阋逜sia1型毒株感染力的影響[J]. 鄭海學,郭建宏,靳野,尚佑軍,田宏,楊亞民,劉湘濤,才學鵬. 科學通報. 2010(14)
[2]牛Asia 1型口蹄疫病毒感染性克隆的構建[J]. 李爽,張潤祥,宋鴿,高明春,劉湘濤,王君偉. 生物工程學報. 2009(11)
[3]RNA病毒作為疫苗載體的研究與應用[J]. 胡偉,段海清,陳惠鵬. 生物技術通訊. 2007(03)
本文編號：3462933
本文鏈接：http://www.sikaile.net/yixuelunwen/dongwuyixue/3462933.html
最近更新
教材專著
