當代，隨著養(yǎng)鹿產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展，鹿肉在歐洲很多國家已成為一種餐桌食品，但在一些東南亞國家例如中國、日本等，人們更注重的是鹿茸的價值。鹿茸在中醫(yī)藥學(xué)中具有提高機體免疫力、抗衰老、促進創(chuàng)傷愈合和骨質(zhì)修復(fù)等作用，被廣泛的用于治療或滋補。鹿茸是哺乳動物中唯一能周期性完全再生的附屬器官，是研究哺乳動物器官修復(fù)及再生的絕佳生物模型。鹿茸的再生源于生茸干細胞，最快生長速度可以達到1～2cm/d，媲美癌細胞，但高速的生長并未使鹿茸發(fā)生癌變，這為癌癥的研究提供了新的醫(yī)學(xué)模型。Galectin-1（半乳糖凝集素1）分子量約為14kDa，是一種糖結(jié)合蛋白，動物凝集素家族的成員之一。Galectin-1（Gal-1）與神經(jīng)修復(fù)、血管再生、軟骨形成等多個生物過程相關(guān)，現(xiàn)階段對它的研究主要集中在癌變過程中，也有其在胚胎發(fā)育過程中的研究報道。鹿茸的再生過程涉及了神經(jīng)、血管、軟骨、皮膚等的生長，研究表明，Gal-1在生茸干細胞中的表達量與普通細胞中的不同，在兩種生茸干細胞之中的表達量也不相同。令人感興趣的是，Gal-1在生茸干細胞中的大量表達并未引起鹿茸的癌變，也就是說，研究Gal-1在鹿茸再生機制中的作用十分重要的。... 

【文章來源】：江蘇科技大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
英文縮略表
第1章 緒論
    1.1 引言
    1.2 研究背景
        1.2.1 鹿茸的發(fā)生
        1.2.2 鹿茸的再生
        1.2.3 Galectin-1 的生物學(xué)特性與功能
        1.2.4 鹿茸干細胞中的 Galectin-1
    1.3 研究的目的及意義
    1.4 研究內(nèi)容
第2章 GAL-1 基因重組慢病毒載體的構(gòu)建及鑒定
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗試劑
        2.1.2 主要試劑配制
        2.1.3 實驗主要儀器
        2.1.4 慢病毒系統(tǒng)
    2.2 實驗方法
        2.2.1 東北梅花鹿 Gal-1 基因 RNAi 靶位點的篩選
        2.2.2 shRNA 寡核苷酸鏈
        2.2.3 shRNA 退火
        2.2.4 感受態(tài)細胞的制備
        2.2.5 載體質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化、小搖
        2.2.6 載體質(zhì)粒 DNA 的小量提取
        2.2.7 載體質(zhì)粒的酶切
        2.2.8 載體質(zhì)粒 DNA 片段的膠回收
        2.2.9 重組片段的連接、轉(zhuǎn)化及小量提取
        2.2.10 重組載體質(zhì)粒的鑒定
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 shRNA 寡核苷酸鏈退火結(jié)果
        2.3.2 載體質(zhì)粒的酶切結(jié)果
        2.3.3 重組 pLVTHM 的 PCR 鑒定結(jié)果
        2.3.4 重組質(zhì)粒測序結(jié)果
    2.4 討論
    2.5 本章小結(jié)
第3章 重組慢病毒的獲得
    3.1 實驗材料
        3.3.1 實驗試劑
        3.3.2 主要試劑配制
    3.2 實驗儀器
    3.3 實驗方法
        3.3.1 psPAX2 的酶切鑒定
        3.3.2 慢病毒三質(zhì)粒的無內(nèi)毒素大量提取
        3.3.3 復(fù)蘇 293t 細胞
        3.3.4 293t 細胞的傳代培養(yǎng)
        3.3.5 重組慢病毒的包裝
        3.3.6 病毒的收集、濃縮
    3.4 實驗結(jié)果
        3.4.1 psPAX2 酶切鑒定結(jié)果
        3.4.2 病毒包裝結(jié)果
    3.5 討論
    3.6 本章小結(jié)
第4章 生茸區(qū)骨膜干細胞原代培養(yǎng)及重組慢病毒的感染
    4.1 實驗耗材
    4.2 實驗儀器
    4.3 實驗步驟
        4.3.1 生茸區(qū)骨膜干細胞原代培養(yǎng)
        4.3.2 生茸區(qū)骨膜干細胞的傳代及凍存
        4.3.3 病毒感染生茸區(qū)骨膜干細胞
        4.3.4 提取細胞總 RNA
        4.3.5 RT-PCR 反應(yīng)
    4.4 實驗結(jié)果
        4.4.1 原代培養(yǎng)結(jié)果
        4.4.2 感染結(jié)果
        4.4.3 RT-PCR 檢測結(jié)果
    4.5 討論
    4.6 本章小結(jié)
第5章 結(jié)論
參考文獻
附錄
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號：3461330