發(fā)布時間：2021-10-27 02:06

　　豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome, PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome virus, PRRSV）引起的，以母豬繁殖障礙（流產(chǎn)、死產(chǎn)、弱胎、木乃伊胎）以及仔豬的呼吸道癥狀和高死亡率為主要特征的一種新型傳染病。該病1987年首次在美國發(fā)生，1990年首次在荷蘭從肺泡巨噬細胞中分離到病原，之后在德國、西班牙、英國、法國、丹麥等國家也先后報道發(fā)生該病。1996年郭寶清等人用間接免疫熒光法首次證實本病在國內(nèi)存在。PRSSV有2個血清型，美洲型和歐洲型，我國爆發(fā)的主要以美洲型為主。為了檢測地方品種豬對PRRSV的耐受性及病毒在體內(nèi)的增殖規(guī)律，15頭經(jīng)RT-PCR檢測為PRRSV抗原陰性和ELISA檢測為PRRSV抗體陰性的30日齡健康萊蕪黑豬仔豬，隨機分為2組，攻毒組10頭，對照組5頭，分別人工鼻腔接種1mL/頭（104TCID50/mL）PRRSV液和PBS。分別于感染后觀察攻毒豬的臨床癥狀，并于第3d、7d、14d、21d... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
符號說明
中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 病原學(xué)特征
        1.1.1 PRRSV 分類
        1.1.2 PRRSV 的理化特性
        1.1.3 PRRSV 的細胞增殖特性
    1.2 PRRSV 分子生物學(xué)特征
        1.2.1 PRRSV 基因組結(jié)構(gòu)
        1.2.2 PRRSV 的蛋白質(zhì)
    1.3 國內(nèi)外研究進展
    1.4 PRRSV 檢測方法研究進展
    1.5 PRRSV 與免疫學(xué)
        1.5.1 PRRSV 與體液免疫
        1.5.2 PRRSV 與細胞免疫
        1.5.3 細胞因子的產(chǎn)生
    1.6 PRRSV 致病機理與臨床癥狀
        1.6.1 臨床癥狀
    1.7 PRRSV 在體內(nèi)分布規(guī)律
    1.8 PRRSV 與細胞受體
    1.9 本研究的目的意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 病毒
        2.1.2 仔豬與攻毒場所
        2.1.3 酶類與試劑
        2.1.4 主要試劑配制
        2.1.5 主要設(shè)備及儀器
    2.2 方法
        2.2.1 實驗設(shè)計
        2.2.2 PRRSV、PCV2、PRV、CSFV 抗體檢測 ELISA 法
        2.2.3 引物及探針的設(shè)計與合成
        2.2.4 陽性標(biāo)準(zhǔn)品的制備
        2.2.5 熒光定量 PCR 方法的構(gòu)建
        2.2.6 絕對熒光定量 PCR 方法的應(yīng)用
        2.2.7 相對熒光定量 PCR 方法的建立
        2.2.8 數(shù)據(jù)分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 萊蕪黑豬攻毒后的臨床癥狀及病理變化
        3.1.1 臨床癥狀觀察
        3.1.2 剖檢病理變化
        3.1.3 體溫變化規(guī)律
    3.2 PRRSV 熒光定量 RT-PCR 檢測方法的建立
        3.2.1 RT-PCR 擴增結(jié)果
        3.2.2 重組質(zhì)粒酶切鑒定
        3.2.3 優(yōu)化熒光定量 PCR 反應(yīng)體系與反應(yīng)程序
        3.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        3.2.5 靈敏性檢測性
        3.2.6 特異性檢測
        3.2.7 重復(fù)性檢測
    3.3 萊蕪黑豬攻毒后體內(nèi)各器官的 PRRSV 載量檢測
        3.3.1 各實質(zhì)臟器病毒載量變化
        3.3.2 各免疫器官中病毒載量變化
        3.3.3 各個組織中病毒載量攻毒后柱狀圖
    3.4 PRRSV 受體檢測相對相對熒光定量 PCR 檢測方法的建立
        3.4.1 檢測各種受體的相對熒光定量 PCR 的擴增效率
        3.4.2 相對熒光定量 PCR 特異性、重復(fù)性試驗
        3.4.3 各組織中病毒、受體及管家基因擴增曲線
    3.5 萊蕪黑豬攻毒后個組織中 PRRSV 受體相對表達量檢測
        3.5.1 攻毒后第 3d 組織中受體相對表達量
        3.5.2 攻毒后第 7d 組織中受體相對表達量
        3.5.3 攻毒后第 14d 組織中受體相對表達量
        3.5.4 攻毒后第 21d 組織中受體相對表達量
        3.5.5 攻毒后第 28d 組織中受體相對表達量
4 討論
5 結(jié)論
6 參考文獻
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文情況



本文編號：3460655