內蒙古絨山羊是自治區(qū)地方優(yōu)質資源品種,絨毛生產性能是內蒙古絨山羊的重要經(jīng)濟性狀。影響絨毛生長的因素有很多,而褪黑激素、miRNA是其中兩個非常重要的因素。近年來,關于褪黑激素影響絨山羊絨毛生長的研究發(fā)現(xiàn),持續(xù)埋植褪黑素可促進羊絨提前進入生長期,誘發(fā)2次生絨并在分子水平改變了很多絨毛生長相關基因的表達,而對于mi RNA這一重要毛發(fā)生長調控因子的研究未見詳細報道。因此,本研究以mi RNA為介導,通過microRNA靶基因指紋圖譜、實時熒光定量PCR、RNA-seq等試驗手段,建立外源褪黑激素、miRNA及其靶基因的關系,進一步從分子水平上的解析褪黑激素促進絨毛生長的機理,為提高絨毛產量和品質提供理論依據(jù)。主要研究結果如下：1、microRNA靶基因指紋圖譜（MTFP）方法的建立建立了一種實驗性獲得miRNA靶基因的新方法（microRNA Targets Finger Print, MTFP）。該方法在設定上游種子序列的互補序列和下游錨定序列的基礎上添加特殊接頭,通過反轉錄和特殊二步PCR將microRNA的靶基因擴增；擴增后的microRNA靶基因在聚丙烯酰胺凝膠電泳中檢測其片段大小... 

【文章來源】：內蒙古農業(yè)大學內蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：128 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
1 引言
    1.1 皮膚及毛囊的結構組成
        1.1.1 皮膚的結構組成
        1.1.2 毛囊的結構組成
    1.2 毛囊形態(tài)發(fā)生及周期性生長
        1.2.1 毛囊形態(tài)發(fā)生
        1.2.2 毛囊周期性生長
    1.3 影響皮膚毛囊發(fā)育的因素
        1.3.1 褪黑激素(Melatonin,MT)
        1.3.2 microRNA與動物皮毛發(fā)育
        1.3.3 microRNA靶基因的研究
    1.4 本研究目的和意義
2 研究一 microRNA靶基因指紋圖譜(MTFP)方法的建立
    2.1 引言
    2.2 試驗技術路線
    2.3 材料和方法
        2.3.1 材料
        2.3.2 方法
    2.4 結果與分析
        2.4.1 miR-203革巴基因檢測
        2.4.2 皮膚樣品miR-203靶基因的檢測分析
        2.4.3 序列比對
        2.4.4 實時定量結果
    2.5 討論
    2.6 小結
3 研究二 褪黑激素影響miRNA及其靶基因的研究
    3.1 引言
    3.2 材料和方法
        3.2.1 材料
        3.2.2 方法
    3.3 結果與分析
        3.3.1 血液中MT的變化
        3.3.2 皮膚組織總RNA及小RNA提取
        3.3.3 miRNA熒光定量體系的建立
        3.3.4 熒光定量PCR產物的檢測
        3.3.5 絨毛生長相關miRNA在不同試驗皮膚組織中的表達
        3.3.6 埋植組和對照組內各miRNA相關性變化
        3.3.7 miRNA靶基因電泳檢測結果
        3.3.8 miRNA靶基因測序結果
    3.4 討論
    3.5 小結
4 研究三 埋植組與對照組10月皮膚組織轉錄組文庫構建及測序分析
    4.1 引言
    4.2 材料和方法
        4.2.1 試驗材料
        4.2.2 試驗方法
    4.3 結果與分析
        4.3.1 cDNA文庫質檢結果
        4.3.2 RNA-Seq測序結果,de novo組裝
        4.3.3 差異表達序列的篩選
        4.3.4 絨毛相關4個pathway在10月埋植組與對照組表達情況
        4.3.5 差異基因的GO、KEGG富集分析
    4.4 討論
    4.5 小結
5 研究四 褪黑激素介導miRNA靶基因的研究
    5.1 引言
    5.2 材料和方法
        5.2.1 試驗數(shù)據(jù)及軟件
        5.2.2 方法
    5.3 結果與分析
        5.3.1 miRNA靶基因預測結果
        5.3.2 候選miRNA靶基因
    5.4 討論
    5.5 小結
6 總體結論
致謝
參考文獻
附圖
附表
附錄
作者簡介



本文編號：3460621