為建立火雞組織滴蟲的檢測方法,本研究采用PCR擴(kuò)增火雞組織滴蟲的18S rRNA基因片段,構(gòu)建質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品作為模板,建立火雞組織滴蟲的SYBR Green I熒光定量PCR檢測方法,并進(jìn)行了初步臨床應(yīng)用。結(jié)果顯示:所建立的SYBR Green I熒光定量PCR檢測方法Cq值與質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品在4.6×10⁶拷貝/μL～4.6×10¹⁰拷貝/μL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)為0.9939,斜率為-3.32;該方法對弓形蟲、柔嫩艾美耳球蟲、毒害艾美耳球蟲、犬巴貝斯蟲等常見原蟲基因組DNA無擴(kuò)增,對質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的檢測下限可達(dá)4.6×10²拷貝/μL,組內(nèi)和組間變異系數(shù)分別為0.09%～0.33%和0.08%～0.21%,敏感性、特異性和重復(fù)性均較好。該方法對147份臨床疑似火雞組織滴蟲感染樣品的蟲體總檢出率高于普通PCR方法,其中對靶器官肝臟和盲腸的檢出率（71.4%、66.7%）明顯高于普通PCR方法的檢出率（57.1%、52.4%）。本研究建立的火雞組織滴蟲SYBR Green I熒光定量PCR檢測方法為臨床開展組織滴蟲病的診斷... 

【文章來源】：中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2020,42(10)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

重組質(zhì)粒的酶切鑒定結(jié)果

根據(jù)檢測結(jié)果建立熒光定量PCR的標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖2A）與熔解曲線（圖2B）。結(jié)果顯示當(dāng)質(zhì)粒濃度為4.6×106拷貝/μL～4.6×1010拷貝/μL時，其與Cq值的線性關(guān)系最佳（圖2）。Cq值和標(biāo)準(zhǔn)品拷貝數(shù)（q）之間的線性關(guān)系表達(dá)式：Cq=-3.32log10(q)+58.19,R2=0.9939,Error=0.369,E=2.001。2.4 特異性試驗結(jié)果

特異性試驗結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]黃羽肉雞實(shí)驗性感染火雞組織滴蟲后體內(nèi)蟲體的動態(tài)分布[J]. 孔令明,禚振男,郭平,曲昌寶,王子靜,劉丹丹,陶建平,許金俊.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2019(07)
[2]組織滴蟲病診斷技術(shù)的研究進(jìn)展[J]. 曲昌寶,劉聰,郭平,李聰,張祖航,陶建平,許金俊.  中國病原生物學(xué)雜志. 2013(04)
[3]雞組織滴蟲病PCR病原學(xué)診斷方法的建立[J]. 曲昌寶,王尚尚,侯照峰,宿世杰,劉丹丹,曹李琴,陶建平,許金俊.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2013(02)

碩士論文
[1]禽組織滴蟲病流行病學(xué)調(diào)查及其分子生物學(xué)診斷方法的建立與應(yīng)用[D]. 曲昌寶.揚(yáng)州大學(xué) 2014



本文編號：3458585