研究旨在建立灘羊肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞的體外培養(yǎng)體系,并探討其在誘導(dǎo)分化過(guò)程中成脂關(guān)鍵基因的表達(dá)規(guī)律。采集10日齡灘羊背最長(zhǎng)肌組織,用Ⅱ型膠原酶消化分離肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞,進(jìn)行細(xì)胞的原代、傳代培養(yǎng)和形態(tài)學(xué)觀察,繼而對(duì)獲得的細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)分化和油紅O染色鑒定。同時(shí),采用qRT-PCR檢測(cè)參與前體脂肪細(xì)胞成脂分化的關(guān)鍵基因PPARγ、C/EBPα、FAS、aP2、LPL mRNA在誘導(dǎo)第0、2、4、6、8 d的表達(dá)水平變化。結(jié)果表明:（1）灘羊原代肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞在分離后約4 h時(shí)開(kāi)始貼壁,貼壁的細(xì)胞呈現(xiàn)為小梭形與不規(guī)則三角形。經(jīng)過(guò)傳代后,細(xì)胞成分均一并且貼壁良好,呈現(xiàn)成纖維細(xì)胞樣形態(tài);細(xì)胞傳代第2～6 d為指數(shù)生長(zhǎng)期,其生長(zhǎng)曲線(xiàn)近似"S"形;（2）細(xì)胞誘導(dǎo)分化第8天時(shí),油紅O染色呈紅色,細(xì)胞具有前體脂肪細(xì)胞的典型特征;（3）PPARγ和FAS的表達(dá)水平在第6天時(shí)最高,隨著誘導(dǎo)時(shí)間增長(zhǎng)PPARγ表達(dá)先升高后降低,FAS表達(dá)先降低后升高再降低;C/EBPα、aP2和LPL的表達(dá)量在第4 d最高,隨著誘導(dǎo)分化時(shí)間增長(zhǎng),C/EBPα和LPL表達(dá)先升高后降低,aP2表達(dá)先升高后降低再升高。 

【文章來(lái)源】：家畜生態(tài)學(xué)報(bào). 2020,41(11)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與主要試劑
    1.2 灘羊肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞分離培養(yǎng)
    1.3 灘羊肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞傳代培養(yǎng)
    1.4 灘羊肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)的測(cè)定
    1.5 灘羊肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化
    1.6 油紅O染色鑒定及脂肪含量的測(cè)定
    1.7 引物設(shè)計(jì)及合成
    1.8 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
    1.9 數(shù)據(jù)處理
2 結(jié)果與分析
    2.1 前體脂肪細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察
    2.2 誘導(dǎo)分化及油紅O染色鑒定
    2.3 生長(zhǎng)曲線(xiàn)
    2.4 脂肪含量測(cè)定
    2.5 脂肪相關(guān)基因表達(dá)檢測(cè)
3 討 論
    3.1 肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞分離培養(yǎng)
    3.2 肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)
    3.3 肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞的誘導(dǎo)分化及鑒定
    3.4 肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞成脂分化關(guān)鍵基因時(shí)序表達(dá)
4 結(jié) 論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3457332