發(fā)布時(shí)間：2021-10-24 07:32

　　為了制備產(chǎn)氣莢膜梭菌致病性毒力因子α毒素的單克隆抗體,試驗(yàn)采用PCR法獲得α毒素基因,克隆入原核表達(dá)質(zhì)粒p ET-30b,轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21感受態(tài)細(xì)胞,構(gòu)建表達(dá)α毒素的重組菌BL21/p ET-30b-α;IPTG誘導(dǎo)重組菌表達(dá),并進(jìn)行SDS-PAGE分析,以純化的重組α毒素蛋白為免疫原免疫Balb/c小鼠,經(jīng)篩選、亞類鑒定及特異性試驗(yàn)檢測單克隆抗體。結(jié)果表明:重組菌表達(dá)的α毒素蛋白分子質(zhì)量約為43 ku;雜交瘤細(xì)胞株3C5能夠穩(wěn)定分泌抗α毒素單克隆抗體,單克隆抗體亞型為Ig G2a型,能夠特異識(shí)別產(chǎn)氣莢膜梭菌天然α毒素蛋白。說明制備的單克隆抗體具有良好的反應(yīng)原性。 

【文章來源】：黑龍江畜牧獸醫(yī). 2017,(03)北大核心

【文章頁數(shù)】：3 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 菌株、細(xì)胞和質(zhì)粒
    1.2 主要試劑
    1.3 重組菌BL21/p ET-30b-α的構(gòu)建
    1.4 α毒素蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
    1.5 α毒素蛋白的純化與復(fù)性
    1.6 單克隆抗體的制備
    1.7 單克隆抗體識(shí)別天然蛋白的特異性檢測
    1.8 單克隆抗體亞型與效價(jià)的測定
2 結(jié)果與分析
    2.1 重組菌BL21/p ET-30b-α的構(gòu)建
    2.2 α毒素蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
    2.3 雜交瘤細(xì)胞的建立
    2.4 單克隆抗體識(shí)別天然蛋白的特異性檢測
    2.5 抗體效價(jià)的測定
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素在干酪乳桿菌中的誘導(dǎo)表達(dá)及其小鼠口服免疫力[J]. 李曉靜,夏春麗,李一經(jīng).  微生物學(xué)報(bào). 2009(08)
[2]幽門螺桿菌vacA基因重組表達(dá)的包涵體復(fù)性及ELISA方法的建立[J]. 黨雙鎖,王宏倉,賈曉黎,袁利超,王寶峰,張欣,張正國,程延安.  世界華人消化雜志. 2005(20)
[3]抗A型產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素單鏈抗體基因的克隆和表達(dá)[J]. 趙寶華,許崇波.  生物工程學(xué)報(bào). 2001(05)



本文編號(hào)：3454859