旨在建立藍舌病病毒（BTV）血清學(xué)ELISA抗體檢測方法,本研究以原核表達并純化的BTV NS4重組蛋白為包被抗原,通過反應(yīng)條件優(yōu)化,建立了一種BTV重組NS4蛋白的間接ELISA抗體檢測方法。SDS-PAGE結(jié)果顯示,獲得大小約52 ku的NS4重組融合蛋白,主要在上清中存在,Western blot顯示,純化后的重組蛋白具有良好的抗原性。通過方陣試驗進行了ELISA反應(yīng)條件優(yōu)化,確定了重組蛋白抗原最佳包被量為3.0μg·孔^-1;血清最佳稀釋倍數(shù)為1∶200,酶標二抗最佳工作濃度為1∶4 000,臨界值分別為0.29和0.35。上述以NS4蛋白作為包被抗原建立的BTV抗體間接ELISA方法檢測敏感性可達1∶1 600;批內(nèi)和批間重復(fù)性變異系數(shù)均小于10%;檢測76份重慶地區(qū)牛群血清樣品,陽性符合率為98%,陰性符合率為100%。本研究建立的間接ELISA方法為臨床BTV血清抗體檢測及BTV血清流行病學(xué)調(diào)查奠定了基礎(chǔ)。 

【文章來源】：畜牧獸醫(yī)學(xué)報. 2020,51(12)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

重組質(zhì)粒酶切鑒定（A）及重組融合蛋白SDS-PAGE分析（B)

圖1 重組質(zhì)粒酶切鑒定（A）及重組融合蛋白SDS-PAGE分析（B)表1 方陣法確定NS4蛋白包被量與血清稀釋度(OD450 nm)Table 1 Determination of NS4 protein coating and serum dilution by square matrix method(OD450 nm) 抗原量/(μg·mL-1)Amount of antigen 陽性血清Positive serum 陰性血清Negative serum 空白對照Blank control 1∶50 1∶100 1∶200 1∶400 1∶50 1∶100 1∶200 1∶400 6.000 0 1.252 3 1.023 5 0.924 5 0.695 4 0.120 9 0.084 1 0.061 2 0.040 9 0.034 2 3.000 0 1.180 8 0.985 2 0.852 9 0.512 9 0.075 7 0.061 4 0.042 9 0.031 9 0.031 9 1.500 0 1.040 8 0.897 6 0.752 6 0.485 6 0.069 8 0.075 4 0.042 8 0.031 4 0.041 8 0.750 0 0.826 4 0.685 6 0.591 7 0.258 9 0.058 7 0.054 7 0.049 2 0.030 6 0.031 4 0.375 0 0.562 4 0.421 6 0.280 1 0.165 9 0.051 6 0.048 7 0.047 6 0.032 8 0.021 0 0.187 5 0.354 8 0.285 6 0.156 3 0.103 9 0.042 1 0.040 3 0.041 3 0.031 0 0.021 3

【參考文獻】：
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本文編號：3453403