豬圓環(huán)病毒病是由豬圓環(huán)病毒Ⅱ型（Porcine Circovirus type2, PCV2）引起的一種免疫抑制性疾病。上世紀(jì)90年代暴發(fā)以來,該病給全世界養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。PCV2可以調(diào)節(jié)多種信號通路,從而參與細(xì)胞免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡。據(jù)證實,PCV2能激活p38MAPK和NF-κB信號通路,同時改變細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子的表達(dá)。人CD74是一種表達(dá)于多種抗原遞呈細(xì)胞的跨膜糖蛋白,主要參與抗原遞呈和免疫應(yīng)答。近來的研究顯示,CD74分子也可以作為一種輔助的信號分子發(fā)揮作用。如作為巨噬細(xì)胞移動抑制因子MIF的特異性受體參與MIF的信號轉(zhuǎn)導(dǎo),或直接參與濾泡B細(xì)胞的成熟和邊緣B細(xì)胞的聚集,以及在幽門螺桿菌感染過程中作為胃上皮細(xì)胞表面受體促進(jìn)IL-8表達(dá)。CD74分子在復(fù)雜的免疫機(jī)制中通過調(diào)節(jié)多種信號通路參與各種疾病的發(fā)生。盡管已經(jīng)證實人CD74能誘導(dǎo)NF-κB信號途徑的激活,但豬CD74在PCV2致病中的作用還未被研究。本研究發(fā)現(xiàn)豬CD74主要表達(dá)于巨噬細(xì)胞系,且能被LPS、Poly（I:C）和PCV2誘導(dǎo)表達(dá)；證實了豬CD74能促進(jìn)1κBα降解和p65核轉(zhuǎn)位從而激活NF-κB;... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
目錄
摘要
Abstract
縮略語表（Abbreviation)
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 豬圓環(huán)病毒病概述
    1.2 PCV2的病毒特征
    1.3 PCV2的流行病學(xué)及危害
        1.3.1 地理分布
        1.3.2 易感動物
        1.3.3 傳播途徑
    1.4 PCV2的致病機(jī)理
    1.5 PCV2感染PK-15細(xì)胞對信號通路的調(diào)節(jié)和細(xì)胞因子的影響
    1.6 NF-κB
        1.6.1 NF-κB家族
        1.6.2 NF-κB家族在免疫細(xì)胞中的功能
        1.6.3 由IκB和IKKs介導(dǎo)的NF-κB激活
        1.6.4 NF-κB對免疫應(yīng)答和炎性因子的影響
    1.7 CD74基因
        1.7.1 CD74基因分子結(jié)構(gòu)
        1.7.2 CD74分子功能研究
        1.7.3 豬CD74基因研究進(jìn)展
2 研究目的與意義
3 材料與方法
    3.1 實驗材料
        3.1.1 菌株、質(zhì)粒、細(xì)胞和病毒
        3.1.2 主要試劑和試劑盒
        3.1.3 培養(yǎng)基和主要試劑的配置
        3.1.4 實驗儀器和器械
        3.1.5 實驗動物
        3.1.6 分子生物學(xué)分析軟件
    3.2 實驗方法
        3.2.1 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.2.2 原核蛋白的表達(dá)、純化以及檢測
        3.2.3 鼠多克隆抗體的制備
        3.2.4 真核重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染及檢測
        3.2.5 CD74蛋白的亞細(xì)胞定位
        3.2.6 雙熒光素酶報告實驗
        3.2.7 相對定量PCR檢測CD74基因及各種細(xì)胞因子的mRNA水平
        3.2.8 數(shù)據(jù)分析
4 結(jié)果與分析
    4.1 豬CD74的序列分析
    4.2 CD74的系統(tǒng)進(jìn)化樹
    4.3 PCV2感染對PK-15細(xì)胞CD74基因表達(dá)的影響
    4.4 LPS和Poly(I：C)刺激PK-15細(xì)胞CD74基因的表達(dá)
    4.5 CD74基因的組織特異性分布
    4.6 重組質(zhì)粒pET-32a-CD74和pcDNA3.1-CD74的構(gòu)建與鑒定
    4.7 CD74蛋白的純化和Western Blot檢測
    4.8 CD74蛋白多克隆抗體的制備
    4.9 CD74蛋白真核表達(dá)的檢測
    4.10 CD74蛋白的亞細(xì)胞定位
    4.11 雙熒光素酶試劑盒檢測豬CD74對NF-κB信號通路的作用
    4.12 Western Blot檢測豬CD74對IκB表達(dá)以及p65核轉(zhuǎn)位的影響
    4.13 Real-Time PCR檢測CD74對IL-6,IL-8和COX-2表達(dá)的影響
    4.14 豬CD74與PCV2互作對NF-κB信號通路的影響
5 討論
    5.1 LPS和poly (I：C)刺激對CD74基因表達(dá)的影響
    5.2 豬CD74的組織特異性分布
    5.3 PCV2對CD74基因表達(dá)的影響
    5.4 豬CD74的亞細(xì)胞定位
    5.5 豬CD74激活NF-κB信號通路
    5.6 豬CD74對IL-6、IL-8和COX-2表達(dá)的影響
6 小結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]CD74 and macrophage migration inhibitory factor as therapeutic targets in gastric cancer[J]. Ying-Xia Zheng,Ting-Ting Rong,Xiang-Liang Yuan,YanHui Ma,Zhi-Hao Wang,Li-Song Shen,Department of Laboratory Medicine,Xinhua Hospital,Shanghai Jiao Tong University School of Medicine,Shanghai 200092,China Ming Yang,Long Cui,Department of Anorectal Surgery,Xinhua Hospital,Shanghai Jiao Tong University School of Medicine,Shanghai 200092,China.  World Journal of Gastroenterology. 2012(18)
[2]CD74 in antigen presentation,inflammation,and cancers of the gastrointestinal tract[J]. Ellen J Beswick,Victor E Reyes.  World Journal of Gastroenterology. 2009(23)
[3]樹突狀細(xì)胞[J]. 唐軍民,張薇.  解剖學(xué)報. 1993(03)



本文編號：3452369