為研究黃芪總黃酮（TFA）對(duì)巨噬細(xì)胞RAW264.7的抗炎免疫雙向調(diào)節(jié)作用,本研究首先采用MTT法篩選TFA對(duì)RAW264.7細(xì)胞的安全劑量;后續(xù)研究均采用以下兩種方式開(kāi)展:采用不同安全劑量（10μg/mL、25μg/mL、100μg/mL）的TFA與正常培養(yǎng)的RAW264.7細(xì)胞作用;上述不同濃度的TFA與RAW264.7細(xì)胞作用后以終濃度為1μg/mL LPS刺激。分別通過(guò)ELISA和RT-PCR檢測(cè)上述兩種情況下RAW264.7細(xì)胞中細(xì)胞因子的含量及其mRNA的轉(zhuǎn)錄水平;采用western blot測(cè)定上述兩種情況下RAW264.7細(xì)胞NF-κB信號(hào)通路中關(guān)鍵蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果顯示,TFA在0～150μg/mL對(duì)細(xì)胞無(wú)明顯毒性;ELISA和RT-PCR結(jié)果顯示,TFA能夠顯著提高正常培養(yǎng)的RAW264.7細(xì)胞上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α含量及其mRNA轉(zhuǎn)錄水平,抑制LPS刺激的RAW264.7細(xì)胞上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α的過(guò)度表達(dá)及其mRNA水平的過(guò)度轉(zhuǎn)錄,并呈劑量依賴性;western blot結(jié)果表明,TFA能夠顯著下調(diào)正常培養(yǎng)的RAW264.7... 

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不同濃度TFA對(duì)RAW264.7細(xì)胞活性影響的檢測(cè)結(jié)果

圖2 TFA對(duì)正常培養(yǎng)的RAW264.7細(xì)胞IL-1β、IL-6和TNF-α含量影響的檢測(cè)結(jié)果2.4 TFA對(duì)正常培養(yǎng)的RAW264.7細(xì)胞各細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄水平影響的檢測(cè)結(jié)果

通過(guò)RT-PCR法檢測(cè)TFA對(duì)LPS刺激的RAW264.7細(xì)胞各細(xì)胞因子mRNA的轉(zhuǎn)錄水平，并經(jīng)Quantity one軟件進(jìn)行條帶灰度分析。結(jié)果顯示，與空白組對(duì)照相比，LPS刺激導(dǎo)致RAW264.7細(xì)胞IL-1β、IL-6及TNF-αm RNA轉(zhuǎn)錄水平急劇增高（p<0.01），而25μg/mL和100μg/mL TFA極顯著抑制了LPS刺激的IL-1βmRNA轉(zhuǎn)錄水平（p<0.01）；各劑量TFA顯著和極顯著抑制了LPS刺激的IL-6 m RNA轉(zhuǎn)錄水平（p<0.05;p<0.01);25μg/mL和100μg/mL TFA顯著和極顯著抑制了LPS刺激的TNF-αmRNA轉(zhuǎn)錄水平（p<0.05;p<0.01）（圖5）。表明TFA能夠抑制LPS刺激的RAW264.7細(xì)胞IL-1β、IL-6及TNF-αmRNA的轉(zhuǎn)錄水平，且呈一定的劑量依賴關(guān)系。圖5 TFA對(duì)LPS刺激的RAW264.7細(xì)胞IL-1β、IL-6和TNF-αm RNA轉(zhuǎn)錄水平影響的檢測(cè)結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
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