本研究選取分離自某發(fā)病鴨場的菌株：經過細菌分離鑒定為鴨源多殺性巴氏桿菌（Pasteurella multocida,PM）,并用此菌株作為制苗菌株,用甲醛滅活后與礦物油佐劑高速乳化混勻,制備鴨源多殺性巴氏桿菌油佐劑滅活疫苗。通過對試制疫苗的物理性狀、疫苗的無菌檢測,疫苗的安全性檢測,對同源毒株的攻毒保護性試驗,采用間接酶聯免疫吸附實驗（Enzye Linked Immunosorbent Assay,ELISA）對試驗鴨和養(yǎng)殖場鴨產生的特異性抗體水平消長規(guī)律進行檢測,完成對該疫苗的安全性、免疫效力等評估。1.細菌的分離鑒定：本研究菌株選取于某發(fā)病鴨場,挑取病料的心血,肝臟,接種于血瓊脂平板培養(yǎng)基中培養(yǎng),通過細菌生物學培養(yǎng)特性、API 20NE生化試紙條和16s rRNA基因PCR鑒定結果表明該菌株為多殺性巴氏桿菌；Biolog全自動微生物鑒定系統(tǒng)鑒定結果表明分離菌株為多殺性巴氏桿菌多殺亞型；PCR莢膜分子分型鑒定結果為莢膜A型多殺性巴氏桿菌。2.疫苗的物理性狀及無菌檢測：疫苗的物理性狀通過從疫苗的外觀,劑型,黏稠度,穩(wěn)定性四個方面來檢驗,結果顯示該疫苗符合油佐劑疫苗制備的基本標準。然后... 

【文章來源】：四川農業(yè)大學四川省 211工程院校

【文章頁數】：56 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略詞表
第一章 文獻綜述
    1. 前言
        1.1 多殺性巴氏桿菌的病原學
        1.2 多殺性巴氏桿菌分型的研究
        1.3 鴨源多殺性巴氏桿菌的免疫機理研究
        1.4 禽多殺性巴氏桿菌疫苗的研究進展
            1.4.1 弱毒疫苗
            1.4.2 滅活疫苗
            1.4.3 禽霍亂莢膜亞單位疫苗
            1.4.4 禽霍亂雙型原生質體融合株滅活苗
            1.4.5 基因疫苗
        1.5 ELISA在檢測疫苗免疫抗體的應用
        1.6 本實驗研究的目的意義
第二章 鴨源多殺性巴氏桿菌的分離鑒定
    1. 試驗材料
        1.1 主要試劑
        1.2 主要儀器
        1.3 培養(yǎng)基的配制
    2. 試驗方法
        2.1 細菌的分離培養(yǎng)
        2.2 細菌生長曲線的測定
        2.3 生化試驗鑒定
            2.3.1 API 20 NE檢測
            2.3.2 Biolog檢測
        2.4 16s rDNA鑒定
            2.4.1 引物設計
            2.4.2 16s rDNA PCR
            2.4.3 PCR產物測序
        2.5 PCR莢膜分型
    3. 結果
        3.1 培養(yǎng)特性
        3.2 生長曲線圖
        3.3 鏡檢結果
        3.4 生化試驗結果
            3.4.1 API 20 NE結果
            3.4.2 Biolog檢測結果
        3.5 16s r RNA PCR結果
        3.6 PCR莢膜分型結果
    4. 討論
第三章 鴨多殺性巴氏桿菌的油佐劑疫苗的制備與應用
    1. 試驗材料
        1.1 主要試劑
        1.2 主要儀器
        1.3 主要試劑配制
    2. 試驗方法
        2.1 毒力的測定
            2.1.1 毒力的復蘇
            2.1.2 細菌毒力的測定
        2.2 疫苗的制作
            2.2.1 毒力的復蘇
            2.2.2 菌液的培養(yǎng)
            2.2.3 菌液的滅活
            2.2.4 菌液的濃縮
            2.2.5 疫苗的制作
        2.3 疫苗物理性狀檢測
        2.4 疫苗的安全性檢測
            2.4.1 無菌檢測
            2.4.2 疫苗安全性試驗
        2.5 動物攻毒保護試驗
            2.5.1 試驗動物
            2.5.2 攻毒保護試驗
            2.5.3 細菌再分離
        2.6 抗體消長規(guī)律檢測
            2.6.1 試驗動物
            2.6.2 抗體檢測
            2.6.3 液的采集
            2.6.4 間接ELISA檢測抗體
        2.7 疫苗的生產應用
    3. 結果
        3.1 疫苗的研制
            3.1.1 疫苗的物理的性狀與無菌檢測結果
            3.1.2 疫苗安全性試驗結果
        3.2 細菌毒力檢測結果
        3.3 攻毒保護試驗結果
        3.4 死亡鴨的臨床癥狀與解剖結果
            3.4.1 臨床癥狀
            3.4.2 解剖病理變化
        3.5 細菌再分離鑒定
        3.6 抗體消長規(guī)律檢測結果
            3.6.1 ELISA最佳反應條件的結果
            3.6.2 ELISA待檢血清檢測結果
        3.7 疫苗的生產應用
    4. 討論
        4.1 疫苗的規(guī)范性
        4.2 疫苗的佐劑與安全性
        4.3 禽多殺性巴氏桿菌油佐劑疫苗的免疫效力
        4.4 抗體消長規(guī)律的研究
        4.5 疫苗的生產應用
結論
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]鴨源巴氏桿菌、大腸桿菌二聯多價蜂膠滅活疫苗研制及其免疫應答反應的動態(tài)研究[D]. 劉義鈴.四川農業(yè)大學 2008



本文編號：3426788