洛克沙胂（Rox）是在世界范圍內廣泛使用的一種含砷飼料添加劑,對促進養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展起了很大作用。Rox促進動物生長的機制至今并不完全清楚,可能與增強細胞生長、免疫及能量代謝相關基因的表達有關,也可能與促進血管生長、增加血管通透性有關。目前國內外對這方面的研究甚少。本實驗室在體內體外對Rox促血管作用進行了相關研究,在此基礎上,本文通過阻斷VEGF及其受體KDR/FLT-1,經MTT法、細胞免疫熒光、Elisa法、Western blot、實時熒光定量PCR,研究Rox促內皮細胞生長作用中VEGF/VEGFR的作用,增加對Rox促血管生成作用VEGF機制的認識,為Rox作為畜禽飼料添加劑使用的安全性評價,以及為有機胂殘留潛在的促（致）癌風險評估提供理論依據。大鼠內皮細胞經不同處理12、24、36、48h后,MTT法檢測細胞活力；Elisa法測定細胞培養(yǎng)液中的VEGF水平；細胞免疫熒光、Western blot及定量PCR檢測細胞中VEGF、 VEGFR （KDR/FLT-1）的表達。不同處理劑量組共11組,分別為PBS陰性對照組（陰）、10ng/mL VEGF陽性對照組（陽）、Rox0.1... 

【文章來源】：揚州大學江蘇省

【文章頁數】：57 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

VEGF基因及不同的轉錄體(引自httpa/www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15602010)

VEGFR-2 (KDR)EGFR-2位于染色體4ql2，全長編碼1356個氨基酸，胞外區(qū)含766個氨基酸，胞內565個氨基酸，由激酶功能區(qū)、68個氨基酸組成的酷氨酸激酶插入區(qū)及C端組成。跨25個氨基酸[22]，總分子量230 kD。在VEGF誘導的促有絲分裂，血管新生和血管的作用中，VEGFR-2是最重要的受體。VEGFR-2蛋白激酶的核心區(qū)存在兩裂片樣結構，而蛋白激酶的活性巾心又剛好位于這兩個裂片之間，由這兩個裂片的殘基共[23]。現在己經發(fā)現的VEGFR-2的磷酸化位點有第951、1054、1059、1175位酷氨EGFR-2在脾、腎、心、肺組織中表達水平較高，主要分布在血管和淋巴內皮細胞中。胞促有絲分裂原VEGF-A與VEGFR-2結合，將細胞外信號傳入細胞內激活信號轉，刺激內皮細胞增殖、增加血管通透性、促進血管新生。前巳經證實了 VEGFR-2的激活負調節(jié)與Src丨nl源的SHP1及SHP2的酪氨酸激酶脫[24二5]。通過蛋白酶體途徑的快速降解以及受體的內陷與溶酶體內降解，導致受體酷酶的激活過程下調。所以VEGFR-2快速內吞及失活對VEGF梯度的精確及局部反

揚州大學碩士學位論文 ^VEGFR-2信號傳遞主要是通過PLCy-PKC-Raf-MEK-MAPK信號通路，Tyr 1175自身憐酸化產生VEGFR相關的結合位點與血清肌酸激酶（Sck)、PLCyl結合的位點與PLCyl結合激活蛋白激酶C，從而激活Ras。而活化的PLCy,能水解4，5- 二磷酸憐脂酰肌醇（PIP2)生成二酷甘油（DAG)和1,4,5-三憐酸肌醇（IP3)。1P3可增加細胞內Ca2+的濃度，而DAG是PKC的生理激活劑。通過誘導細胞外調節(jié)激酶Erk途徑(p42/44胞外信號調節(jié)激酶MAPK)的激活。ERK能轉移到細胞核，在細胞核內磷酸化和活化轉錄因子（包括c-Jun和三元復合因子）從而誘導c-fos基因的轉錄VEGFR-2還可激活憐脂酷肌醇（PI3K),導致脂質磷脂醜肌醇（3，4,5)-P3的增加，從而激活蛋白激酶B (AKT/PKB),內皮型一氧化氮合酶(eNOs),小GTP結合蛋白Rac。Akt/PKB抑制Bcl-2相關的凋亡啟動子和caspase-9兩種凋亡蛋白，從而保證細胞的存活[35]。內皮型一氧化氮合酶生成的一氧化氮，增加血管通透性和細胞遷移，是通過Rac進一步促進的[36_37]。VEGF誘導的細胞骨架重塑、細胞遷移是通過VEGFR-2與P38MAPK、HSP27激酶結合來實現的[38]。VEGFR2

【參考文獻】：
碩士論文
[1]洛克沙胂促血管生成作用及VEGF的表達研究[D]. 崔衛(wèi)波.揚州大學 2013
[2]內皮細胞的分離培養(yǎng)及洛克沙胂對內皮細胞影響的初步研究[D]. 劉學.揚州大學 2013



本文編號：3421093