中性粒細胞（polymorphonuclear neutrophils,PMNs）是先天免疫系統(tǒng)的重要組成部分,牛圍產(chǎn)期乳腺和子宮中的炎性疾病易感性的增加與PMNs功能降低密切相關。而牛外周雌激素（estrogen,E）在PMNs活性調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。E作為一種重要的脂溶性類固醇激素,其細胞調(diào)節(jié)效應主要通過雌激素受體（estrogen receptors,ERs）介導的慢速基因組途徑和快速非基因組途徑實現(xiàn)。PMNs活性變化過程始終伴隨著細胞能量代謝,而AMPK/mTOR是細胞內(nèi)能量代謝調(diào)控網(wǎng)絡的關鍵信號通路。實施本研究旨在闡釋E在調(diào)節(jié)PMNs免疫活性過程中細胞內(nèi)能量代謝狀態(tài)與E水平之間的信號作用機制,為評價圍產(chǎn)牛外周E與PMNs免疫活性的直接關聯(lián)提供理論依據(jù)。試驗采集母牛靜脈血分離PMNs,分別用LPS、E和ICI體外誘導0h、1h、2h、4h、8h。采用qPCR、Western Blot方法檢測ERα、ERβ、GPR30的表達,免疫活性信號通路關鍵信號TLR2、TLR4、MyD88、NF-κB以及細胞能量代謝關鍵信號AMPK、mTOR的蛋白表達與磷酸化水平。結(jié)果顯示:低濃度E顯著抑... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古民族大學內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

瑞氏-姬母薩染色結(jié)果（40×）

14雌激素通過AMPK/mTOR通路調(diào)節(jié)PMNs活性的機制研究由圖 2 可見，LPS 刺激 PMNs 后，TLR2 和 TLR4 的基因表達和蛋白表達水平（＜0.05）、MyD88 基因表達水平（p＜0.05）、NF-κB-p65 蛋白表達（p＜0.05）及酸化水平（p＜0.05）顯著增強。這表明，在 LPS 誘導的 PMNs 炎性反應中，激TLR2/TLR4-MyD88-NF-κB 信號通路是 PMNs 活性增強的重要信號應答特征。AB C

圖 4 A：western blot 結(jié)果；B、C、D：ERα、ERβ、GPR30 蛋白表達量；E、F:ERα、ERβ、mRNA 表達Figure 4 A: Results of western blot；B, C, D: protein expression levels of ERα, ERβ, GPR30；E, F: mRNA exprelevels of ERα and ERβ由圖 4 可見，ERα和 ERβ基因表達和蛋白表達無變化，GPR30 蛋白表達顯著增（p＜0.05），并具有時間依賴性。這表明，低濃度 E 誘導 PMNs 時，E 可能通過 GP介導的非基因組途徑調(diào)節(jié)細胞效應。AB CD EF

【參考文獻】：
期刊論文
[1]雌激素通過GPR30-AMPK-mTOR通路誘導Ishikawa細胞自噬增強細胞活力（英文）[J]. 何磊,胡惠軍,潘勇權(quán),譚秋芬,林小龍.  中國生物化學與分子生物學報. 2017(04)



本文編號：3416147