現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)丹參有效成分具有抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用,丹參多糖對免疫因素介導(dǎo)的肝損傷有較好的緩解效果。但在分子層面上的作用機(jī)制卻尚不完全清楚。本試驗(yàn)通過探究丹參多糖對炎癥介質(zhì)因子的釋放和核轉(zhuǎn)錄因子蛋白NF-κB及絲裂原活化蛋白激酶MAPK表達(dá)的影響,在分子層面上探討丹參多糖減輕免疫因素誘導(dǎo)的肝損傷的可能機(jī)制,為進(jìn)一步開發(fā)和應(yīng)用中草藥多糖提供依據(jù)。體內(nèi)試驗(yàn),將100只昆明種小鼠隨機(jī)分為5組,空白對照組（A）,LPS模型組（B）,不同劑量丹參多糖（SMP）組（C組500 mg/kg、D組250 mg/kg和E組125mg/kg）,每組20只。C,D,E組連續(xù)給予丹參多糖7 d。LPS誘導(dǎo)小鼠免疫性肝損傷。LPS腹腔注射2h后,處死小鼠,收集血清,分光光度計(jì)檢測血清中ALT,AST活性和HE染色觀察肝臟病理變化。ELISA法檢測血清TNF-α、IFN-γ、IL-6和PGE₂的含量。RT-PCR檢測肝組織中TNF-α、IFN–γ、COX-2、CXCL-10和iNOS mRNA的表達(dá)。Western blot檢測肝內(nèi)COX-2、CXCL-10和iNOS蛋白表達(dá)及NF-κB通路... 

【文章來源】：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)河北省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
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縮略詞列表
1 引言
    1.1 免疫性肝損傷機(jī)制的研究進(jìn)展
        1.1.1 炎癥反應(yīng)與肝損傷
        1.1.2 NO與肝損傷
        1.1.3 前列腺素與肝損傷
        1.1.4 肝臟免疫細(xì)胞與肝損傷
        1.1.5 肝外免疫細(xì)胞與肝損傷
        1.1.6 TNF-α與肝損傷
        1.1.7 IFN-γ與肝損傷
        1.1.8 IL-6與肝損傷
    1.2 多糖緩解免疫性肝損傷的研究進(jìn)展
        1.2.1 多糖在清除自由基中的作用
        1.2.2 多糖在免疫調(diào)節(jié)及抗炎中的作用
    1.3 本研究的意義及目的
        1.3.1 肝病已成為動物養(yǎng)殖發(fā)展中隱藏著的最大“攔路虎”
        1.3.2 肝損傷及其損傷程度與免疫系統(tǒng)存在極大的聯(lián)系
        1.3.3 中藥在治療肝損傷具有獨(dú)特的優(yōu)勢
2 材料與方法
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 主要試劑及藥品
        2.1.2 主要儀器設(shè)備
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.0 試驗(yàn)動物
        2.2.1 試驗(yàn)動物分組與處理
        2.2.2 肝組織結(jié)構(gòu)的觀察
        2.2.3 血清AST、ALT活性測定
        2.2.4 炎癥因子水平測定
        2.2.5 RT-QPCR測定肝組織mRNA的轉(zhuǎn)錄水平
        2.2.6 肝組織內(nèi)p-p65,p-IκBα表達(dá)的測定
        2.2.7 MTT檢測RAW264.7細(xì)胞存活率
        2.2.8 MTT檢測丹參多糖與LPS聯(lián)合作用后細(xì)胞的活性
        2.2.9 Diff-QuiK染色觀察RAW264.7細(xì)胞形態(tài)
        2.2.10 ELISA法測定細(xì)胞上清液中炎癥介質(zhì)的含量
        2.2.11 RT-PCR法檢測炎癥因子的基因轉(zhuǎn)錄水平
        2.2.12 westernblotting測定NF-κB在RAW264.7中的表達(dá)
3 結(jié)果
    3.1 免疫性肝損傷小鼠病理組織形態(tài)學(xué)變化
    3.2 丹參多糖對免疫性肝損傷小鼠ALT和AST活性的影響
    3.3 丹參多糖對免疫性肝損傷小鼠血清中炎癥因子的影響
    3.4 丹參多糖對免疫性小鼠肝損傷小鼠肝組織中炎癥因子mRNA的影響
    3.5 丹參多糖對免疫性肝損傷小鼠血清中PGE2和肝組織中COX-2mRNA的影響
    3.6 丹參多糖對LPS致肝損傷小鼠肝組織中CXCL-10表達(dá)的影響
    3.7 丹參多糖對LPS致肝損傷小鼠肝組織中iNOS表達(dá)的影響
    3.8 丹參多糖對LPS致肝損傷小鼠肝組織中NF-κB表達(dá)的影響。
    3.9 丹參多糖對LPS致肝損傷小鼠肝組織中MAPK表達(dá)的影響。
    3.10 丹參多糖對細(xì)胞活力的影響
    3.11 丹參多糖對LPS刺激的RAW264.7形態(tài)變化的影響
    3.12 丹參多糖對RAW264.7分泌TNF-α的影響
    3.13 丹參多糖對RAW264.7分泌IL-6的影響
    3.14 丹參多糖對RAW264.7分泌L-1β和IL-10的影響。
    3.15 丹參多糖對RAW264.7分泌的PGE2分泌的影響
    3.16 丹參多糖對RAW264.7分泌NO的影響
    3.17 丹參多糖對炎癥因子基因相對轉(zhuǎn)錄水平的影響
    3.18 丹參多糖對核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的蛋白表達(dá)的影響
4 討論
    4.1 肝損傷模型的建立及丹參多糖緩解肝損傷的效果
    4.2 丹參多糖對免疫性肝損中炎癥因子表達(dá)的影響
    4.3 丹參多糖對免疫性肝損傷中NF-κB表達(dá)的影響
    4.4 丹參多糖對免疫性肝損傷中MAPK表達(dá)的影響
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
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致謝
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【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3415695