為研究人/禽流感病毒對(duì)細(xì)胞的敏感性差異,本研究選取9種常用細(xì)胞,分別以10⁵ TCID₅₀的人源甲型流感病毒（IAV）CA04株與禽流感病毒（AIV）Y280株感染不同細(xì)胞,檢測(cè)不同細(xì)胞中流感病毒的增殖水平;利用免疫熒光試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞表面唾液酸（SA）受體類(lèi)型及其與流感病毒的結(jié)合能力;采用流式細(xì)胞術(shù)定量檢測(cè)每種細(xì)胞表面的SA類(lèi)型及含量;通過(guò)RT-PCR方法檢測(cè)唾液酸轉(zhuǎn)移酶（ST）（ST3GAL4、ST6GAL1）基因mRNA的轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果顯示,感染CA04株后,MDCK、16HBE、 DF-1和A549檢測(cè)到了病毒滴度,但病毒低度較低為:3.2×10² TCID₅₀/0.1 mL～0.95×10¹ TCID₅₀/0.1mL。感染Y280株后,病毒滴度從高到低依次為MDCK、DF-1、Vero、293T、CHO-k1、Hep-2、A549、16HBE和BHK,病毒滴度為6.3×10³ TCID₅₀/0.1 mL～9... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2020,42(10)北大核心CSCD

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圖1 兩株流感病毒在不同細(xì)胞中的復(fù)制能力的檢測(cè)結(jié)果

將9種細(xì)胞分別加入FITC標(biāo)記的植物凝集素SNA和MAA I后，采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面被標(biāo)記的唾液酸受體的熒光強(qiáng)度，并采用Flow Jo V10軟件分析各細(xì)胞表面的MFI即SA的含量。結(jié)果顯示，SNA標(biāo)記的DF-1細(xì)胞的熒光強(qiáng)度顯著高于其它細(xì)胞（p<0.05),MDCK的熒光強(qiáng)度顯著高于293T、Hep-2、A549、16HBE、和BHK(p<0.05）（圖3A),MDCK的熒光強(qiáng)度與CHO-k1、Vero無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p>0.05）（圖3A);MAA I標(biāo)記的各細(xì)胞之間的熒光強(qiáng)度差異不顯著（圖3B）。表明9種細(xì)胞中MDCK和DF-1細(xì)胞表面SAα（2-6)Gal糖鏈結(jié)構(gòu)最為豐富，其結(jié)合人流感病毒CA04株的能力較強(qiáng)；而SAα（2-3)Gal糖鏈結(jié)構(gòu)在細(xì)胞之間差異不大，其結(jié)合AIV Y280株的能力無(wú)顯著差異，與2.1的結(jié)果基本一致。同時(shí)進(jìn)一步表明，SA糖鏈含量與流感病毒的敏感性呈正相關(guān)。圖3 各細(xì)胞表面SA的定量檢測(cè)結(jié)果

各細(xì)胞表面SA的定量檢測(cè)結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]HA 226/228雙位點(diǎn)突變對(duì)H5N1禽流感病毒受體結(jié)合特異性和致病性的影響[J]. 谷春陽(yáng),張乾義,孔暉暉,張瑩,姜永萍,關(guān)云濤,胡永浩,陳化蘭.  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2014(08)
[2]唾液酸受體并非流感病毒各亞型在雪貂組織中播散分布的決定因子[J]. 占玲俊,鄧巍,鮑琳琳,呂琦,李楓棣,馬春梅,許黎黎,秦川.  中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志. 2012(04)



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